一、材料
無菌
1. 活檢標本
2. 1.2 ml 塑料凍存管（Nagle Nunc）
3. DBBS
4. 收集液
5. 二甲基亞砜（如果放在一個無菌容器中，為半滅菌的）
6. 器皿（解剖刀、解剖鑷、培養皿等，同為原代培養）
二、操作步驟
1. 除去壞死組織、脂肪和纖維組織后，將腫瘤切成約 1~2 mm 的小塊。同原代培養，將腫瘤塊放入 DBBS 中浸洗。
2. 在每個凍存管中放入 4 或 5 個腫瘤塊。
3. 將 1 ml 含有 10%DMSO 的生長培養液加入到放有腫瘤塊的凍存管中，在室溫下放置 30 min。
4. 將凍存管按 1°C/min 冷凍（見方案 20.1），然后將凍存管移入液氮罐。為了避免爆炸危險，不要將凍存管浸入液氮。
5. 將凍存管放在 37°C 溫水中，使其融化（要有適當的預防措施，見方案 20.2）。
6. 用乙醇將凍存管徹底擦拭后打開，使腫瘤塊沉淀后，吸出一半培養液。
7. 緩慢補充不含 DMSO 的新鮮培養液，輕輕搖動混合后，放置 5 min。
8. 用不含 DMSO 的培養液逐漸置換全部的培養液，然后將腫瘤塊移入 Petri 培養皿，按常規原代培養方法進行操作，但每培養瓶中放入兩倍多細胞。
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