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  • 發布時間:2019-08-08 23:19 原文鏈接: 凝膠選擇指導

    Invitrogen提供了大量的涵蓋面廣的蛋白分離預制膠,包括不同的成分,百分比濃度和格式。使用合適的膠百分比濃度,緩沖系統,上樣孔格式以及膠的厚度,對于獲得最好的結果非常重要。以下提供了幫助你選擇適合你應用的正確凝膠的信息。

    E-PAGE? 96 High-Throughput System是整合的、無緩沖液系統,設計用來檢測和分析大量的蛋白樣品,時間僅僅需要14分鐘。

    NuPAGE? Novex Gels組合了完美的技術和極度的可靠性。貨架期長達12個月,比其它蛋白凝膠需要的電泳時間更短,中性pH值,為大多數蛋白的分離和轉移提供優良的性能。現在可以獲得8個分離范圍,分離絕大多數不同大小的蛋白。

    Novex? Tris-Glycine Gels基于傳統的Laemmli buffer system,可能被使用在所有鞍椎姆擲搿Mü齀nvitrogen公司可以獲得12種不同百分比濃度和加樣孔大小的凝膠。

    Novex? Tricine Gels是分離肽和低分子量蛋白的理想凝膠。

    Novex? Zymogram Gels使用gelatin或者casein作為底物分離活性蛋白酶,可以鑒定蛋白酶的大小和活性。

    預制聚丙烯酰胺凝膠一般信息:

    基質: 聚丙烯酰胺
    厚度: 1.0mm或者1.5mm 
    大小: 8cm(h)x8cm(w)
    cassette 大小: 10cm(h)x 10cm(w)
    加樣孔格式:17孔,15孔,12孔,10孔,9孔,5孔,1孔,2D/準備 孔或者IPG孔
    堆積膠:大多數Novex? gels為4%堆積膠

    * Novex?預制膠適用于XCell SureLock? Mini-cell和大部分其它設計為10cm(h)×10cm(w)gel cassette的mini-cells。E-PAGETM預制膠適用于E-Gel? Base,E-Gel? PowerBaseTMv.4或者E-Base?單元。

    選擇合適的凝膠百分比濃度

    一般而言,分離分子的大小應該決定你選擇丙烯酰胺的濃度。使用低百分比濃度凝膠分離較大的分子,高百分比濃度的凝膠分離較小的分子。進行等電聚焦時,這條規則例外。參看凝膠遷移圖發現最適合你應用的凝膠。通常,為了達到最佳的分辨率,分子應該移動通過凝膠長度的70%。當蛋白分子量范圍寬或者未知,梯度膠通常是最好的選擇。

    選擇加樣孔格式和凝膠厚度

    我們提供大部分聚丙烯酰胺凝膠為9孔的格式(17孔,15孔,12孔,10孔,9孔,5孔,1孔,2D/準備 孔或者IPG孔)。一些類型的凝膠可以得到兩種厚度(1.0mm和1.5mm)。如果上樣量大(>30μl)時,使用較厚的凝膠(1.5mm)和較少的上樣孔(5孔)更為合適。如果blotting,記住蛋白從1.0mm的凝膠中比從1.5mm的厚膠中更容易轉移。表1總結了各種類型凝膠的特定和應用。使用表2確定哪一種上樣孔格式最適合容納你的樣品量。

    表1 選擇使用膠的類型 膠的類型膠濃度分離范圍貨架期平均電泳時間應 用蛋白質分析E-PAGE? 966%10-200 kDa1年14分鐘高通量、變性蛋白的分離,以進行重組生產分析和蛋白譜研究,可以電泳后染色和western blotsNuPAGE? Bis-tris10%,12%,4-12%1.5-300 kDa1年35-50分鐘pH中性,12個月貨架期凝膠。對于變性和還原蛋白具有優良的分辨率。是分析小到中等大小蛋白的最佳選擇。NuPAGE? Bis-Acetate7%,3-8%30-400 kDa8個月60分鐘8個月貨架期的高性能凝膠。對于較大的蛋白效果極佳。也能夠用來做非變性電泳(native)。Tris-Glycine4%,6%,8%,10%,12%,4-20%,4-12%,14%,16%,18%,8-16%,10-20%6-500 kDa1-2月90分鐘準確和可重復的分離非變性(native)和變性蛋白。可以得到各種范圍的Laemmli-style 凝膠。Tricine10%,16%,10-20%2-200 kDa1-2月90分鐘小肽的分離IEFpH3-7,pH3-10pI3.0-pI8.55月150分鐘根據等電點分離可溶性蛋白。Zymogram10%(gelatin),12%(casein),4-16%(casein)30-200 kDa2個月90分鐘利用casein 和gelatin作為底物,確定特別活性蛋白酶。

    表2 獲得最佳結果的推薦上樣量聚丙烯酰胺凝膠1孔IPG孔2D孔5孔9孔10孔12孔15孔17孔          最大上樣量/孔1.0 mm厚度700 μl7 cm IPG條400 μl60 μl28 μl25 μl20 μl15 μl15 μl1.5 mm厚度n/an/a600 μln/an/a37 μln/a25 μln/a推薦獲得最佳分辨率的最大上樣量*每條蛋白帶,考馬斯亮蘭染色12 μgn/a12 μg2 μg0.5 μg0.5 μg0.5 μg0.5 μg0.5 μg注釋:E-Gel? 要求20μl樣品量/孔 。*NuPAGE?膠比Tris-Glycine 或Tricine有更高的蛋白上樣能力。



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