本文介紹幾種常見的微生物基礎試驗的目的、原理、內容等,以便剛剛接觸微生物的同志們對試驗有個基本的認識.
實驗一 常用培養基的制備、滅菌與消毒
一、實驗目的
1、掌握配制培養基的一般方法和步驟;掌握干熱天菌、高壓蒸汽滅菌及過濾除菌的操作方法;
2、了解培養基的配制原理;了解常見滅菌、清毒基本原理及方法.
二、實驗原理
培養基是人工按一定比例配制的供微生物生長繁殖和合成代謝產物所需要的營養物質的混合物.培養基的原材料可分為碳源、氮源、無機鹽、生長因素和水.根據微生物的種類和實驗目的不同,培養基也有不同的種類和配制方法.
牛肉膏蛋白胨培養基是一種應用最廣泛和最普通的細菌基礎培養基,有時又稱為普通培養基.由于這種培養基中含有一般細胞生長繁殖所需要的最基本的營養物質,所以可供微生物生長繁殖之用.
干熱天菌、高壓蒸汽滅菌方法主要是通過升溫使蛋白質變性從而達到殺死微生物的效果.
三、試劑與器材
1、器材 試管、三角瓶、燒杯、量筒、玻璃棒、培養基、分裝器、天平、牛角匙、高壓蒸汽滅菌鍋、pH度紙、棉花、牛皮紙、記號筆、麻繩、紗布、吸管、培養皿、電烘箱、注射器、微孔濾膜過濾器、鑷子等.
2、試劑 牛肉膏、蛋白胨、NaCl、瓊脂
四、實驗內容
1、稱量→溶化→調pH→過濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無菌檢查
2、干熱滅菌:裝入待滅菌物品→升溫→恒溫搖床→降溫→開箱取物
3、高壓蒸汽滅菌:加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無菌檢查
4、過濾除菌:組裝滅菌→連接→壓濾→無菌檢查→清洗滅菌
五、關鍵步驟及注意事項
1、要嚴格按配方配制.
2、調pH不要過頭.
3、干熱滅菌要注意物品不要堆放過緊,注意溫度的時間控制,70oC以下放物、取物.
4、高壓滅菌要注意物品不要過多,加熱后排除冷空氣,到時降壓回零取物.
5、過濾除菌要注意各部件滅菌,壓濾時,壓力要適當,不可太猛太快,濾膜要注意清洗保存.
六、思考題
1、培養基配好后,為什么必須立即滅菌？如何檢查滅菌后的培養基是無菌的？
2、在配制培養基的操作過程中應注意些什么問題?為什么？
3、培養微生物的培養基應具備哪些條件?為什么？
4、培養基的配制原則是什么？
實驗二 土壤中微生物分離純化培養
一、實驗目的
1、掌握倒平板的方法和幾種常用的分離純化微生物的基本操作技術;掌握微生物培養方法;
2、了解不同的微生物菌落在斜面上、半固體培養基和液體培養基中的生長特征;進一步熟練和掌握微生物無菌操作技術.
二、實驗原理
從混雜的微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過程稱為微生物的分離與純化.
常用的分離、純化方法:單細胞挑取法,稀釋涂布平板法,稀釋混合平板法,平板劃線法.
稀釋涂布平板法步驟:倒平板－制備土壤污水稀釋液－涂布－培養－挑菌落.
平板劃線法步驟:倒平板－標記培養基名稱－劃線.
三、試劑與器材
1、器材 盛9ml無菌水的試管、盛90ml無菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶、無菌玻璃涂棒、無菌吸管、接種環、酒精燈、無菌培養皿、顯微鏡、血細胞計數板等.
2、試劑 牛肉膏蛋白胨培養基,高氏1號培養基,查氏培養基
四、實驗內容
1、土壤稀釋液的制備
2、微生物分離純化:稀釋涂平板法,平皿劃線分離法,微生物培養技術
五、關鍵步驟及注意事項
1、掌握含菌培養基的配制,嚴格控制溫度.
2、平板劃線應防止染菌,同時應注意劃線深度及密度.
六、思考題
1、如何確定平板上某單個菌落是否為純培養？請寫出實驗的主要步驟.
2、如果要分離得到極端嗜鹽細菌,在什么地方取樣品為宜？并說明理由.