分光光度法是通過測定被測物質在特定波長處或一定波長范圍內的光吸收度，對該物質進行定性和定量分析的方法。 1. 基本原理 單色光輻射穿過被測物質溶液時，被該物質吸收的量與該物質的濃度和液層的厚度（光路長度）成正比，即朗伯 - 比爾定律，這是吸收光譜法定量的理論依據，其關系式如式 3-1 ： A = ECL 式 (3-1) 式中A 為吸收度 ； E 為吸收系數，即單位濃度、單位液層厚度的吸收度數值； C 為溶液濃度； L 為液層厚度。 紫外- 可見分光光度法是根據物質分子對波長為 200~760nm 這一范圍的電磁波的吸收特性所建立的光譜分析方法。《中國藥典》 (2005 年版 ) 有 10 種藥材用該法進行藥材的有效性評價。其主要特點為：靈敏度高，可達 10 -4 g/ml ~10 -7 g/ml ；準確度高，相對誤差為 2 ％ ~5 ％。中藥中有紫外吸收的成分或本身有顏色的成分，在一定的濃度范圍內，其溶液的吸收度與濃度符合朗伯 - 比爾定律，均可用此法進行分析。本法適于大類成分的含量測定，如總黃酮、總蒽醌、總生物堿等。 2. 定量測定法 測定時，應以配制供試品溶液的同批溶劑為空白對照，采用 1cm 的石英吸收池，在選（規）定的吸收峰波長 ±2nm 以內測試幾個點的吸光度，或由儀器在選定波長附近自動掃描測定，以吸光度最大的波長作為測定波長。一般供試品溶液的吸光度讀數，以在 0.3 ～ 0.7 之間的誤差較小。當溶液的 pH 值對測得結果有影響時，應將供試品溶液和對照品溶液的 pH 值調成一致。 用于含量測定的方法一般有以下幾種。 (1) 對照品比較法 凡溶液中待測物質吸收符合朗伯 - 比爾定律，則分別配制供試品溶液和對照品溶液，對照品溶液中所含被測成分的量應為供試品溶液中被測成分標示量的 100 ％±10 ％，所用溶劑也應完全一致，在該物質的最大波長下測定供試品溶液和對照品溶液的吸光度后，按式 3-3 計算供試品中被測溶液的濃度： C x ＝ ( A x ／ A R ) C R 式 (3-2) 含量＝ ( C x × D ) / W ×100 式 (3-3) 式中C x 為供試品溶液的濃度； A x 為供試品溶液的吸光度； C R 為對照品溶液的濃度； A R 為對照品溶液的吸光度； D 為稀釋倍數； W 為供試品取樣量。 （ 2 ）吸收系數法 先測出對照品在 λ max 下的吸光度，然后求得吸收系數；也可從有關手冊或藥典中查得有關化合物的吸收系數。采用與對照品相同的溶劑，配制供試品溶液，在相同的波長處測定其吸光度，求出吸收系數，計算含量。 含量％＝ [( ) x /( ) R ]×100% 式 (3-4) 式中， ( ) x 為供試品的百分吸收系數； ( ) R 為對照品的百分吸收系數。 用本法測定時，應注意儀器的校正和檢定。 （ 3 ）標準曲線法 從待測物質的吸收光譜圖上選定某一最大吸收波長，用一系列不同濃度的標準溶液在該波長處分別測得它們的吸光度，用吸光度對濃度作圖。若待測物質對光的吸收符合朗伯 - 比爾定律，應得到一條通過原點的直線，即標準曲線。在同樣條件下測定樣品溶液的吸光度，在標準曲線上可讀出樣品溶液的濃度。Z