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  • 發布時間:2019-09-13 14:09 原文鏈接: 分子排阻高效液相層析實驗

    • 基本方案

               

    實驗材料

    蛋白質

    試劑、試劑盒

    SE緩沖液

    儀器、耗材

    層析柱

    實驗步驟

    1.  用已脫氣HPLC級水洗去SE柱的貯存溶劑,流速1 ml/min。在室溫以已脫氣的SE緩沖液在1 ml/min 流速平衡SE柱30 min 或直至基線穩定。

    2.  注射100 μl  緩沖液進行一次空白樣品的假層析,檢測器設定在210~220 nm,0.1~1.0 AUFS。適宜的設定一般是:100 pmol 時為0.1AUFS,500 pmol 時0.3,1 nmol 時0.5,2 nmol 時1.0 ;作圖速度為0.5 cm/min。

    3.  在2 000 g 離心蛋白標準或蛋白混合物5 min 注射100 μl 上清,并重復步驟2操作。收集每個層析峰于不同的聚丙烯管子,并確定峰的洗脫體積。


    4.  各分部組分脫鹽,并用Speedvac蒸發器除去溶劑。

     

    5.  最后一個洗脫峰的保留時間不應超過第1個峰的2倍,如果不是這樣的話,流動相加20%甲醇以抑制蛋白與介質的結合。

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