分離和培養人角膜內皮細胞實驗——分離人角膜內皮細胞

完整的人角膜

CMF-SalineG胰蛋白酶 EDTADMEM F-12 GASPDMEM F-12 2FB:DMEM:Ham’sF-12 1:1 含2%FBSCMF GASP

手術刀或單刃安全刀片彎虹膜剪 11cm(4-3 8 in.)Jeweler’s懾子 10cm(4 in.)角膜剪 19mm刃 尖頭Colibri縫線鉗0.1 mm

(a)用PBSA將角膜清洗3次，每次5 min。

(b)剪除殘留的鞏膜，結膜和虹膜。

(c)加人2 ml 1.2 U/ml中性蛋白酶II，4℃過夜，輕微攪動。

(d)將加人中性蛋白酶II的角膜放人4℃搖床搖30 min。

(e)用DMEM/F-12/GASP清洗角膜。

(f)解剖顯微鏡下，小心去除小梁網，剝離內皮層并用胰蛋白酶/EDTA消化37℃，30 min。

(g)加入同等體積的DMEM/F-12/2FB并拍散細胞。

(h)離心400g,10 min,棄去上清。

(i)加人1 ml培養基，輕柔的重懸細胞并計數。