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  • 發布時間:2019-04-17 19:17 原文鏈接: 分離小鼠室管膜下區

    實驗概要

    分離小鼠室管膜下區

    主要試劑

    DPBS

    主要設備

    6 cm細胞培養皿、醫用鑷、外科手術剪、不銹鋼尖頭醫用鑷、外科手術刀、體視顯微鏡

    實驗材料

    小鼠:實驗所選取的小鼠年齡大小由實驗目的決定。如果需要胎鼠神經干細胞,一般選擇E13.5 d或E14.5 d的胎鼠,其細胞增殖能力強,取材可取全腦;
    如果需要成體神經干細胞,則選取2~3月齡的成體小鼠,從室管膜下區分離神經干細胞。
    !注意:所有實驗必須按照相關政府及機構制定的關于實驗動物的規定執行。

    實驗步驟

    (1)預冷DPBS。
    (2)根據動物使用的相關規定用頸椎脫臼法處死小鼠,剪開頭皮,去除顱骨,剝離硬膜,將大腦暴露出來。
    (3)將大腦轉移到盛有10 mL預冷的DPBS的6 cm培養皿中。解剖操作需在顯微鏡下進行。
    (4)在視交叉處做一個冠狀切面,以分開前腦和中腦。
    (5)沿中線將左右半球切開,在截面處可見海馬區。
    (6)將鑷子插入海馬區與皮層白質之間,小心地將它們分開,去除海馬區。
    !注意:側壁位于海馬區的正下方,當去除海馬區時,注意不要將鑷子插得太深以免傷害室管膜下區。
    (7)由于室管膜下區后面有紋狀體,此時,可以根據條紋直接看到腦室側壁的輪廓。用剪刀繞一圈將室管膜下區呈香蕉狀切下。
    (8)用剪刀伸進室管膜下區和后面紋狀體之間,小心地將組織剪下并分離出來。
    (9)將剪下的室管膜下區組織放入冷的DPBS中,冰上放置。
    !注意:盡可能地把室管膜下區切薄一些,避免混入紋狀體組織。


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