實驗概要
分離小鼠室管膜下區
主要試劑
DPBS
主要設備
6 cm細胞培養皿、醫用鑷、外科手術剪、不銹鋼尖頭醫用鑷、外科手術刀、體視顯微鏡
實驗材料
小鼠:實驗所選取的小鼠年齡大小由實驗目的決定。如果需要胎鼠神經干細胞,一般選擇E13.5 d或E14.5 d的胎鼠,其細胞增殖能力強,取材可取全腦;
如果需要成體神經干細胞,則選取2~3月齡的成體小鼠,從室管膜下區分離神經干細胞。
!注意:所有實驗必須按照相關政府及機構制定的關于實驗動物的規定執行。
實驗步驟
(1)預冷DPBS。
(2)根據動物使用的相關規定用頸椎脫臼法處死小鼠,剪開頭皮,去除顱骨,剝離硬膜,將大腦暴露出來。
(3)將大腦轉移到盛有10 mL預冷的DPBS的6 cm培養皿中。解剖操作需在顯微鏡下進行。
(4)在視交叉處做一個冠狀切面,以分開前腦和中腦。
(5)沿中線將左右半球切開,在截面處可見海馬區。
(6)將鑷子插入海馬區與皮層白質之間,小心地將它們分開,去除海馬區。
!注意:側壁位于海馬區的正下方,當去除海馬區時,注意不要將鑷子插得太深以免傷害室管膜下區。
(7)由于室管膜下區后面有紋狀體,此時,可以根據條紋直接看到腦室側壁的輪廓。用剪刀繞一圈將室管膜下區呈香蕉狀切下。
(8)用剪刀伸進室管膜下區和后面紋狀體之間,小心地將組織剪下并分離出來。
(9)將剪下的室管膜下區組織放入冷的DPBS中,冰上放置。
!注意:盡可能地把室管膜下區切薄一些,避免混入紋狀體組織。