1. 準備溶液：
PBS
RSB-8 10 mmol/L Tris；10 mmoI/L NaCl，8 mmoI/L 乙酸鎂，pH 7.4
RSB 10 mmol/L Tris；10 mmol/L NaCl，1.5 mmol/L 乙酸鎂，pH 7.2
0.88 mol/L 蔗糖，5.0 mmol/L 乙酸鎂
0.34 mol/L 蔗糖，0.5 mmol/L 乙酸鎂
0.88 mol/L 蔗糖
2. 800 g 離心 8 分鐘收獲轉瓶培養的對數生長期 HeLa 細胞（0.5 X 109）。
3. 早帶寬松 Teflon 研棒的 Teflon-玻璃勻漿器中，用馬達推動進行溫和勻漿將細胞沉淀重懸浮于冰冷的 PBS 中，800 g 離心 8 分鐘。
4. 重復 PBS 清洗步驟，稱取細胞沉淀的重量。
5. 溫和勻漿使細胞懸浮于 20 倍體積的 RSB-8 中。冰水放置 30 分鐘使細胞膨脹。
6. 1000 g 離心膨脹的細胞 8 分鐘。
7. 溫和勻漿使細胞重懸浮于加有 0.05 倍體積 10% NP-40 的 RSB 緩沖液中。NP-40 的終濃度為 0.5%。
8. 用帶寬松研棒的 Dounce 勻漿器勻漿 20~60 次直到細胞破裂釋放出不帶細胞質的細胞核。
9. 800 g 離心 8 分鐘。吸出上清。
10. 進行溫和勻漿將細胞核粗品重懸浮于含 0.88 ml/L 蔗糖和 5.0 mmol/L 乙酸鎂的溶液中（20 ml/g 細胞）。2500 g 離心 20 分鐘。吸出上清。
11. 溫和勻漿將細胞核沉淀懸浮于含 0.34 mol/L 蔗糖和 0.5 mmol/L 乙酸鎂的溶液中。
12. 用注射器或吸管將樣品轉移至一在冰水中放置的菊花狀超聲振蕩頭中。
13. 細胞核懸液進行 10 秒鐘超聲處理（10~20 秒的冷卻間隔）。總的處理時間在 60~110 秒之間。
14. 超聲處理物下加一層 3~4 倍體積的 0.88 mol/L 蔗糖溶液（不含乙酸鎂），3000 g 離心 20 分鐘。 展開 | 