分離核仁
從人肝臟或胎盤組織中分離核仁
HeLa細胞細胞核或核仁的制備
高鎂法分離核仁
| 實驗材料 | 肝臟 |
|---|---|
| 試劑、試劑盒 | NKM |
| 儀器、耗材 | 粗孔濾紙 Teflon-玻璃勻漿器 |
| 實驗步驟 | 1. 制備溶液： NKM：0.13 mol/L NaCl，5 mmol/L KCl，8 mmol/L MgCl2 0.34 mol/L 蔗糖，3 mmol/L MgCl2 2.3 mol/L 蔗糖，10 mmol/L MgCl2 0.34 mol/L 蔗糖，0.05 mmol/L MgCl2 0.88 mol/L 蔗糖 2. （可選）用冰冷的 NKM 溶液灌注肝臟。 3. 稱組織重量，用剃刀或剪刀切成非常小的碎塊，或者用組織壓擠器進行壓擠。 4. 每克組織加 10 倍體積的含 0.34 mol/L 蔗糖和 3 mmol/L MgCl2 的溶液進行勻漿破碎細胞。 5. 勻漿通過 4 層粗孔濾紙以去除結締組織。 6. 4℃，500 g 離心 10 分鐘。 7. 用緊密結合的 Teflon-玻璃勻漿器勻漿使細胞核粗品重懸浮于 10 倍體枳（每克起始組織）的含 2.3 mol/L 蔗糖，10 mmol/L MgCl2 的溶液中。 8. 40000 g 離心 1 小時沉淀細胞核。 9. (可選）溫和地將細胞核沉淀重懸浮于 0.5 倍體積的含 0.34 mol/L 蔗糖，0.25% (w/v) Triton X-100 和 5 mmol/L MgCl2 的溶液中，500 g 離心 10 分鐘得到沉淀。 10. 將細胞核重懸浮于 0.16 倍體積的含 0.34 mol/L 蔗糖和 0.05 mmol/L MgCl2 的溶液中。 11. 超聲處理細胞核懸液 4 次，每次大約 10 秒鐘。 12. 在超聲處理過的細胞核下面加一層含 0.88 mol/L 蔗糖和 0.05 mmol/L MgCl2 的溶液，2000 g 離心 30 分鐘。 13. 收集核仁沉淀。 |
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