[器材和試劑]
● PCR試劑和設備
● 含有起始scFV基因的載體pHENl單鏈模板DNA（50ng/ul）
● Geneclean試劑盒
● Wlzard PCR純化試劑盒
● scFvJHL2XhoFOR引物：5'-GAG TCA TTC TCG TCT CGA GAC GGT GAC CAG GGT GCC-3'
● scFvJH3XhoFOR引物： 5,-GAG TCA TTC TCG TCT CGA GAC GGT GAC CAT TGT CCC3'
● scFvJH4-5XhoF（）R引物：5,-GAG TCA TTC TCG TCT CGA GAC GGT GAC CAG GGT TCC-3'
● scFvJH6XhoFOR引物： 5'-GAG TCA TTC TCG TCT CGA GAC GGT GAC CGT GGT GCC-3'
● XhoI限制性酶（NEB） 以及廠家的2號緩沖液（NEB2）
● VL基囚文庫載體
[方法]
1. 配制50ul PCR反應混合液， 包含：
● 水，34.5ul
● 20XdNTP（每種5mmol/L）， 2,5ul
● 10XVent聚合酶緩沖液，5.0ul
● LMB3引物（10pmol/u1），2.5ul
● scF討HXhoFOR引物（10pmol/ul），2.5ul
● scFv模板DNA（100ng）， 2.0u1
● VentDNA聚合酶（2單位），1.0u1
2. 在有加熱蓋的熱循環儀內加熱反應混合液到94℃，5分鐘。
3. 以94℃30秒、42℃30秒、72℃1分鐘的條件共循環25次，擴增VH基因。
4. 用Wizard PCR純化試劑盒芝之PCR產物。
5. 用XhoI和NcoI消化PCR產物；但除了用XhoI替代 NcoI,還需在NEB2緩沖液中進行消化。
6. 制備VL基因文庫載體；但需用XhoI和NcoI消化載體。
7. 連接已消化的PCR產物和已消化的載體，并電轉化到大腸桿菌TG1中，構建輕鏈改組文庫。