1、直接鏡檢 取潰瘍處滲出液、膿液、穿刺液等標本作氫氧化鉀 涂片，可見圓形、厚壁10～60μm直徑的芽生孢子，芽孢可以單生或多生、典型者為多生，芽孢小者1～ 2μm直徑，大者10μm或更大。標本中發現形成特征性多芽體的大型（常>15μm）酵母菌。
2、真菌培養 在葡萄糖蛋白胨瓊脂上25℃，呈菌絲型生長，生長慢，菌落小。鏡檢可見1～2μm寬的分隔分支菌絲，在菌絲兩側有圓形或卵圓形3～6μm大小的側生小分生孢子，類似皮炎芽生菌。在血瓊脂或腦心葡萄糖血瓊脂37℃，呈酵母型生長，鏡檢與直接涂片所見相同。
3、血清學試驗 可檢測抗體和抗原。有免疫擴散法和補體結合法。
4、肺部X線檢查 損害常位于肺的下野，多為雙側。損害可呈結節狀、浸潤性或條紋狀。結節可以分散，也可融合。浸潤可以局限，也可彌散。一般肺部病變未見有鈣化現象。
5、免疫學檢查 包括副球孢子菌素皮試、補體結合試驗等。免疫試驗有時與其他系統性真菌病如皮炎芽生菌病等發生交叉反應，因此陽性結果不能作為診斷依據。
6、組織病理 以化膿性肉芽腫為主，有中性粒細胞浸潤，在膿液的巨細胞中有菌體孢子，多呈單芽性芽生孢子。