動態濁度法定量檢測乳糖一水合物中細菌內毒素的含量
劉晉 1，王芳芳 2，馮宇 3*，楊喆 3，秦煥甲 3，殷鑫 3
(1. 聊城市食品藥品檢驗檢測中心，聊城 252000；2. 聊城市食品藥品檢驗檢測中心，聊城 252000；
3. 科德角國際生物醫學科技（北京）有限公司，北京 100068）
摘要 目的：應用美洲鱟試劑（Limulus Amebocyte Lysate，LAL）的動態濁度法，定量檢測乳糖一水合物中細菌內毒素。方法：依據
2015 年版《中華人民共和國藥典》<1143 細菌內毒素檢查法 > 的要求，應用Pyros Kinetix?
Flex（PKF）細菌內毒素定量檢測系統，使用葡聚糖抑制緩沖液稀釋溶解LAL，建立細菌內毒素的標準曲線并確定稀釋倍數，通過測定供試品溶液中外加內毒素的回收率進行干擾試驗，并定量測定樣品中的細菌內毒素含量。Pyros?
EQS 軟件自動繪制并出具標準曲線，計算溶液中內毒素的絕對含量。
結果：內毒素檢測標準曲線濃度線性范圍為 0.001~0.032 EU·mL-1（r=-0.9854），標準曲線回歸方程為 logT=-0.200logC+2.943；供試品在稀釋 100、300、500 倍時均對試驗無干擾作用，細菌內毒素回收率在50%~200%之間；4 批樣品的內毒素定量測定結果符合規定。
結論：在PyrosKinetix?Flex（PKF）細菌內毒素定量檢測系統平臺，使用 LAL
建立的動態濁度法，可用于乳糖一水合物的細菌內毒素定量檢測。LAL 有更高的靈敏度，葡聚糖抑制緩沖液可有效阻止由(1 → 3)-β-D-
葡聚糖引起的干擾，提高試驗的成功率，符合數據完整性的要求。
關鍵詞：葡聚糖抑制緩沖液；乳糖一水合物；動態濁度法；細菌內毒素；干擾試驗；美洲鱟試劑；最大有效稀釋倍數；最高靈敏度
Content determination of bacterial endotoxin in lactose
monohydrate by kinetic turbidimetric method
LIU Jin1，WAHG Fang-fang2，FENG Yu2，YANG Zhe3，QIN Huan-jia3，YIN Xin3
(1. Liaocheng Food and Drug Testing and
Testing Center，Liaocheng 252000，China;2.Liaocheng Food and Drug Testing
and Testing Center，Liaocheng 252000，China；3.Coastal-Times International
BioMedical Technologies（Beijing）Co.，Ltd.，Beijing 100068，China）
Abstract Objective：To develope a kinetic
turbidimetric method with Limulus Amebocyte Lysate（LAL) to quantify
bacterial endotoxin in lactose monohydrate. Methods：According
to the requirements in Chapter 1143 Bacterial Endotoxin Test in Chinese
Pharmacopoeia 2015 edition，by using Pyros Kinetix? Flex（PKF）bacterial
endotoxin quantitative detection system and LAL dissolved in glucan
inhibitory buffer，a standard curve for bacterial endotoxin was
established and the dilution factor was determined.The interference test
was performed by measuring recovery rate of endotoxin added in the test
solution，and bacterial endotoxin in the sample was quantitatively
determined.Pyros? EQS software automatically produced a calibration
curve to calculate the absolute content of endotoxin in each solution. Results：Concentration linear ranges of endotoxin detection calibration curve was
0.001-0.032 EU·mL-1（r=-0.985 4）with recovery rate of
50%-200%，and no interference was observed for test samples diluted
100-500 times.Results of quantitative determination of endotoxin in four
batches of samples met the requirements.Conclusion：On
the platform of PKF bacterial endotoxin quantitative detection
system，the kinetic turbidimetric endotoxin method using LAL can be used
for bacterial endotoxin detection of lactose monohydrate.
Glucan inhibitory buffer effectively prevented the interference caused by（1 → 3）-β-D-glucan，improved the test success rate，sensitivity and accuracy of detection.the experiment met data integrity requirements.
Keywords：glucashield beta glucan inhibiting buffer；lactose monohydrate；kinetic turbidimetric method；bacterial
endotoxin；interference test；Limulus Amebocyte Lysate（LAL）；maximum valid dilution；highest sensitivity
注射用福沙匹坦二甲葡胺是用于抑制腫瘤化療所致嘔吐反應的藥物，以靜脈注射的方式給藥。由于鉑類、阿霉素等多種抗腫瘤藥物在使用過程中會產生嚴重的嘔吐反應，而急性劇烈的惡心、嘔吐可能導致患者脫水、電解質紊亂、營養不良，嚴重者可能因消化道黏膜損傷而出血、感染甚至死亡，嚴重影響化療效果，因而止吐藥是抗腫瘤治療重要的輔助治療藥物。福沙匹坦二甲葡胺注射劑與其他止吐藥聯用，可用于防治中等催吐及大劑量催吐的腫瘤化療（包括大劑量順鉑）初始和反復用藥引起的急性和遲后的惡心和嘔吐［3］。
乳糖一水合物是一種白色或類白色的晶體狀粉末，緩慢溶于水，幾乎不溶于乙醇（96%），是注射用福沙匹坦二甲葡胺注射液的一類重要輔料。對乳糖一水合物進行細菌內毒素檢測，是對藥物生產源頭的質量把關與控制，可使藥物的質量更有保證，故在福沙匹坦二甲葡胺注射劑生產的質量控制中具有重要意義［2］。目前國內多采用凝膠法對乳糖一水合物進行細菌內毒素檢測，質量標準規定其限值應小于0.005 EU·mg-1。本研究參照 2015 年版《中華人民共和國藥典》<1143 細菌內毒素檢查法 >［1］中的動態濁度法，對乳糖一水合物中的細菌內毒素定量檢測方法進行開發，試圖找到一種干擾影響小、靈敏度高、更為準確的定量檢測方法。
1 儀器與試藥
Pyros Kinetix? Flex 96（PKF 96）細菌內毒素定量檢測系統（Associates of Cape Cod 公司)。Pyros? EQS 軟件（搭配 PFK 細菌內毒素定量檢測系統的專用軟件，Associates of Cape Cod.Inc.）
乳糖 一 水 合 物（DMV Fonterra Excipients GmbH &Co.KG 公 司，Lactohale? 200 Milled lactose monohydrate，批號：Lactose-1031D73、Lactose-1031D74、Lactose-1031D75、Lactose-1031D76）。
動 態 濁 度 法 美 洲 鱟 試 劑（LAL，批 號 518-11-903-T，靈敏度λ=0.001 EU·mL-1，規格 5 mL·瓶 -1）；細菌內毒素工作標準品（control standard endotoxin，CSE；批號 162）；無熱原水（LAL reagent water，LRW批 號 AD17657282，規 格 50 mL· 瓶 -1）；葡 聚 糖 抑制緩沖液（批號 1207063）；硼硅酸鹽玻璃反應試管（8 mm×75 mm）；硼硅酸鹽玻璃稀釋試管（12 mm×
75 mm）。以上所有試劑與耗材均來自 Associates of Cape Cod 公司。
