動物實驗技術1

實驗動物常用作病原微生物的分離和鑒定，進行動物接種實驗應選擇易感性高、健康的動物。常用的動物有小鼠、豚鼠和家兔。根據實驗要求可通過皮下、皮內、肌肉、腹腔、靜脈等途徑注射。感染動物死亡后，必要時進行尸體解剖并作病原體的檢查。

一、實驗動物接種法

（一）小白鼠接種法

【材料】

1．小白鼠。

2．無菌注射器(1ml)及針頭。

3．碘酒、75%酒精、接種物。

【方法】

1．皮下注射法：一般注射于腹部。

(1) 用注射器吸取接種物。

(2) 小白鼠固定法：用右手拇指和食指捏住小鼠尾部，使它在桌上向前爬行，輕輕向后拉鼠尾(圖8-1)，再用左手食指及拇指捉住其兩耳及頸部皮膚，將手反轉，使小白鼠腹部向上，把小白鼠尾巴和左腿夾于左手小指和手掌之間(圖8-2)。

(3) 用碘酒及酒精消毒腹部皮膚，針頭稍平刺入皮下，注入接種物0.2～0.3ml，如局部有隆起表示已注入，注射后局部再次消毒(圖8-3)。

2．腹腔注射法：常注射于下腹部白線稍左或稍右部位，固定方法同上。注射時先將針頭平刺于皮下，然后稍抬起針頭刺人腹腔中，注射接種物0.5ml(圖8-4)。

3、肌肉注射法：多注射于肌肉發達，無大血管經過的部位，如后腿肌肉，將針頭直刺入肌肉深層，注射量不超過0.2ml。

4．腦內注射法：將標本接種幼齡鼠(體重l0g左右)腦內(從眼內眥與鼻根部之間刺入)，用左手拇指食指固定頭部，注射量不超過0.1ml。



圖8-1 小鼠抓持方法 圖8-2 小鼠徒手固定方法

圖8-3 小鼠皮下注射示意圖 圖8-4 小鼠腹腔注射示意圖

（二）家兔接種法

【材料】

1．家兔。

2．無菌注射器和針頭。

3．碘酒、75%酒精、接種物。

【方法】

1．皮內注射法：皮內注射多為觀察皮膚反應，所以注射前應將局部毛剪去。常注射在背部。注射局部消毒后，將針頭的針孔向上平刺皮層內，注射物推入后，如局部隆起，其上毛孔明顯，即表示注入。注射量不超過0.1ml。

2．靜脈注射法：多采用外耳緣靜脈注射(圖8-5)。

(1) 將家兔放入固定盒固定好，拔去注射部位的毛，局部消毒，手指輕彈兔耳使血管擴張。

(2) 針頭經皮膚平刺入血管中，回一下血，緩慢注入接種物。

(3) 注射后局部消毒，并用消毒棉球輕壓片刻，以免血液流出。

圖8-5 兔耳緣靜脈注射

二、接種后動物管理

實驗動物接種后，應仔細管理，以免引起實驗室內污染或造成實驗中的誤差，影響實驗結果。

1．隔離：動物經注射感染材料后，應與健康動物分開飼養，并在飼養籠上貼標簽，注明接種材料、劑量、日期、途徑和接種者姓名，以免混淆。

2．觀察：注射后每日觀察1～2次，注射動物有無異常。

3．測體重、體溫，需要時須每日測體溫。一般動物體溫較人高，現將常用動物正常體溫列于下供參考(肛門測定)。

家兔 38.3～40.8℃

豚鼠 38.6～39.4℃

小白鼠 32.4～38℃

4．動物死亡后，應立即進行尸體解剖。不需解剖者，則焚燒或用消毒液浸包后深埋。

三、細菌致病作用的測定

細菌的致病力包括侵襲力和毒素。前者是指依靠酶的作用或形成莢膜侵襲機體組織的能力，細菌所產生的酶有血漿凝固酶、鏈激酶、透明質酸酶等。后者有內、外毒素2種。

（一）血漿凝固酶試驗(見實驗九)

（二）透明質酸酶試驗

【原理】

透明質酸是葡萄糖醛酸和乙酰氨基葡萄糖聚合物，是結締組織基質成分。乙型溶血性鏈球菌等產生的透明質酸酶可水解透明質酸，使結締組織疏松，通透性增高，使細菌和毒性物質易于擴散，故此酶亦稱擴散因子。

【材料】

1．乙型溶血性鏈球菌肉湯培養濾液(含透明質酸酶)、1%美藍液(或黑墨汁)、生理鹽水。

2．小試管、lml注射器、6號針頭等。

3．家兔。

【方法】

1．將家兔背部兩側毛剪除干凈，75%酒精消毒注射部位。

2．將細菌培養濾液與少許1%美藍液混合，注射0.2ml于家兔一側皮內，為實驗側。生理鹽水與少許美藍混合，同法注入家兔另一側皮內，為對照側。注射時避免液體漏出，以免皮膚著色，影響結果的觀察。

3．2h后，比較兩側美藍在皮下的擴散范圍。

【結果】

家兔試驗側皮下深藍色擴散區明顯大于對照側，說明了透明質酸酶的作用。

（三）鏈激酶試驗

【原理】

鏈激酶，又稱溶纖維蛋白酶，能水解血漿纖維蛋白，使凝固的血塊溶解，出現液化現象。乙型溶血性鏈球菌及某些金黃色葡萄球菌株可產生此酶，有助于細菌及毒性產物在感染病灶內擴散。

【材料】

1．乙型溶血性鏈球菌肉湯培養物(含鏈激酶)、四聯球菌肉湯培養物、生理鹽水、枸櫞酸鹽抗凝血、5%氯化鈣液。

2．小試管、1ml注射器、37℃水浴箱等。

【方法】

1．取帶棉塞小試管3支編號①、②、③，各加入抗凝血1ml。