（1）尿液半乳糖檢查尿糖陽性，葡萄糖氧化酶法尿糖陰性，紙層析可鑒別出其為半乳糖。
（2）新生兒篩查半乳糖血癥用Beutler法過篩缺陷酶，觀察有無熒光的產生，以此作為最后評定的依據，本病無熒光產生。酶活性的缺陷也可從肝、腸黏膜、成纖維細胞及白細胞中得到反映。
（3）血半乳糖濃度測定正常濃度為110～194μmol/L(應用半乳糖氧化酶或半乳糖脫氫酶法)，患者其血濃度升高。
（4）尿半乳糖和半乳糖醇濃度測定可用酶法測定。
（5）紅細胞1-磷酸半乳糖測定。
（6）半乳糖代謝相關酶測定此為確診本病的重要依據。
（7）非特異性的生化指標測定諸如蛋白尿、葡萄糖尿等。