金黃色葡萄球菌細胞壁成分中的A蛋白能與人及多種哺乳動物(豬、兔、羊、鼠等)血清中IgG類抗體的Fc段結合。IgG的Fc段與SpA結合后,兩個Fab段暴露在葡萄球體表面,仍保持其抗體活性和特異性當其與特異性抗原相遇時,也出現特異凝集現象。在本凝集反應中,金黃色葡萄球菌菌體成了IgG抗體的載體,稱為協同凝集反應。本反應也可用于檢測微量抗原。
一、材料
1、抗原:可溶性傷寒桿菌“O”抗原;
2、免疫血清:傷寒桿菌0901免疫兔血清;
3、10%CoWan1株金黃色葡萄球菌(含大量蛋白A)的菌液;
4、0.5%甲醛,用PBS配制;
5、吸管、滴管、玻片等。
二、方法
1、10%葡萄球菌菌懸液的制備
CoWan1株葡萄球菌接種于柯氏瓶,37℃培養18-24小時,用PBS洗下菌苔,每分鐘2500轉速度離心20分鐘。沉淀菌用PBS洗兩次后,用0.5%甲醛(用PBS配置)在室溫中固定3小時。置于80℃水浴中4分鐘以破壞菌體的自源性分解酶。再用PBS洗滌2次后配成10%菌懸液;
2、致敏葡萄球菌
1毫升10%的菌懸液加0.1毫升傷寒O抗血清充分混合放入37℃水浴中30分鐘(中間需搖動兩次)。取出后經每分鐘2500轉速度離心20分鐘,棄去上清液,沉淀菌用PBS洗滌2次后配成10%菌懸液;
3、協同凝集實驗
取傷寒“O”可溶性抗原一滴致敏葡萄球菌懸液,一滴在載波片上混勻,觀察約2分鐘。一般在幾秒鐘內即可發生凝集;
滴一滴致敏葡萄球菌懸液于玻片上,用接種環取傷寒O菌培養物少許置于懸液中使成均勻孔狀,觀察約2分鐘,記錄有無凝集;
用傷寒“O”桿菌培養物與未致敏的葡萄球菌菌液或用痢疾桿菌培養物與致敏的葡萄球菌菌液作玻片凝集,均為陰性反應,不出現凝集。