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  • 發布時間:2020-08-18 08:51 原文鏈接: 單克隆抗體上清制備實驗

    實驗方法原理


    實驗材料 目的雜交瘤


    試劑、試劑盒 完全 DMEM-10 培養液(含 5~10 mmol/L HEPES pH 7.2~7.4)


    儀器、耗材 50 ml 無菌錐形離心管175 cm2 組織培養瓶


    實驗步驟


    1. 將雜交瘤置于一個盛有完全 DMEM-10 培養基的 175 cm2 組織培養瓶中,放入 37℃ CO2 培養箱,直至生長旺盛適于分傳。


    2. 按 1:10 的比例將細胞分傳到一個新的 175 cm2 的培養瓶中,加入完全 DMEM-10 培養液到總體積為 100 ml,并置 37℃ CO2 培養箱中直至細胞過度生長,此時溶液變酸(變黃色),細胞死亡(約 5 天)。


    3. 將培養瓶中的內容物轉移到無菌的 50 ml 的錐形離心管中,室溫下 1500 g 離心 10 min, 收集上清。用 ELISA 法或用流式細胞儀檢測 MAb 上清的滴度。


    4. 將上清無菌保存,在 4℃ 時通常可穩定地存放數周至數月;在 -20℃ 時可存放數月至數年;-70℃ 時可永久保存。分裝成數份凍存。盡量避免反復凍融。


    注意事項


    當細胞密度達到 1×106~2×106 細胞/ml 時,大多數細胞系需要分傳至新的培養液或新的培養瓶中。監控組織培養瓶中的細胞活度、污染及密度。細胞不能長得過密,否則會死亡,這種細胞瀕死的狀況會增加細胞表型改變的可能性。


    其他


    如果上清滴度很高,則該雜交瘤可用于大規模純化制備或用以產生腹水。

     


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