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  • 發布時間:2022-10-19 17:22 原文鏈接: 單克隆抗體制備飼養細胞的相關介紹

      在體外的細胞培養中,單個的或數量很少的細胞不易生存與繁殖,必須加入其它活的細胞才能使其生長繁殖,加入的細胞稱之為飼養細胞(Feedercell)。在細胞融合和單克隆的選擇過程中,就是在少量的或單個細胞的基礎上使其生長繁殖成群體,因此在這一過程中必須使用飼養細胞。許多種類的動物細胞都可以做飼養細胞,如正常的脾細胞、胸腺細胞、腹腔滲出細胞等,常選用腹腔滲出細胞,其中主要是巨噬細胞和淋巴細胞。

      應用腹腔滲出細胞的好處是:

      一方面做飼養細胞,另一方面巨噬細胞可以吞噬死亡的細胞和細胞碎片,為融合細胞的生長造成良好的環境。腹腔細胞的來源可以是與骨髓瘤細胞同系鼠。也可以是其他種類的小鼠,如C57鼠,昆明小白鼠等。

      1.材料

      (1)小鼠(Balb/c或C57小白鼠)若干只。

      (2)11.6%蔗糖溶液(經10磅30min高壓滅菌)。

      2.操作方法

      (1)拉頸處死小鼠。

      (2)70%酒精浸泡消毒10min。

      (3)用手術剪將小鼠腹部剪開一小口,剝開皮膚,露出腹腔。

      (4)用注射器將4ml11.6%蔗糖溶液注入腹腔,用手指輕揉1min仍用該注射器回抽腹腔液體,加入離心管。

      (5)1000r/min離心10min。

      (6)棄上清,以HT培養液將細胞制成懸液。臺盼藍染色計數活細胞,使每毫升含40萬個活細胞。

      (7)以1ml吸管將細胞種入微量培養皿,每孔0.05ml,含2萬個細胞,放入CO2培養箱培養,即可供細胞融合和克隆化之用.

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