單聚及二聚核小體的純化實驗

寡聚核小體中等或大的寡聚核小體成分

CaCl2MgCl2微球菌核酸酶EDTA甘油梯度緩沖液

超速離心機聚異質同晶管梯度制備裝置

1. 解凍約 1 ml 寡聚核小體（約 1～2 mg/ml 比較理想），預熱到 30℃。

2. 加入 100 mmol/L CaCl₂ 至終濃度為 1.5 mmol/L， 1 mol/L MgCl₂ 至終濃度為 3.5 mmol/L。

3. 加入 50 U/ul 微球菌核酸酶至終濃度為 0.1 U/ug 多聚核小體，30℃ 消化 10 min。

4. 加入 0.5 mol/L EDTA 至終濃度為 15 mmol/L 終止反應。

5. 4℃，10 000 g 離心 30 S，沉淀不溶物質。

6. 在 0.5 in×2. 5 in 聚異質同晶超速離心管中鋪制4. 7 ml 線性梯度，上層為 10％ 甘油梯度緩沖液，下層為 30％。

7. 將 0.5 ml 消化反應液放置在梯度上，4℃，100 000 g 離心 18 h （如 Beckman SW55 轉子 35 000 r/min）。

8. 收集梯度， 每 5 滴流出液回收一管，大約有 24 管。

9. 進行瓊脂糖凝膠電泳分析各流出液。

10. 如有需要，將得到的單聚和二聚核小體組分進行濃縮，但最后用 10％ 甘油梯度緩沖液進行透析）。4℃ 保存 1 個月以上，或在液氮或干冰上速凍，在 -80℃ 保存兩年以上。