厄貝沙坦膠囊的人體生物利用度實驗設計——HPLC法

厄貝沙坦是AT1受體阻斷劑，臨床上用于高血壓病的治療。由于該藥療效確切，在治療劑量下（常用量為50-300 mg/d，耐受量>900 mg/d），幾乎無不良反應，因此可望成為抗高血壓的一線藥物。藥代動力學研究表明，厄貝沙坦膠囊口服吸收較快（Tmax 1.5-2h），其絕對生物利用度約為60%-80%，半衰期t1/2 約為11-16 h，該藥主要通過代謝后從尿中排出體外，原形腎排不到3%。

試驗目的

本試驗旨在研究國產厄貝沙坦膠囊的相對生物利用度，為它是否與劑量相同的進口厄貝沙坦膠囊具有生物等效性提供依據。

生物樣品分析方法的建立和驗證

采用HPLC法測定血藥濃度

1，樣品制備：樣品制備過程中，高、中、低三個濃度的提取回收率高于50%

2，HPLC測定條件：

3，特異性：

須證明所測定物質是受試藥品的原形藥物。生物樣品所含內源性物質或代謝物不得干擾對樣品所測物質的分析。應提供空白生物樣品、標準品、空白生物樣品加入標準品及用藥后生物樣品的色譜圖，以反映分析方法的特異性。

4，最低定量限：

最低定量限（LOQ）是標準曲線上的最低濃度點，又稱靈敏度，表示測定樣品中符合準確度和精密度要求的最低藥物濃度（應能滿足測定3-5個半衰期時樣品中的藥物濃度，或Cmax1/10~1/20時的藥物濃度）。

5，標準曲線與線性范圍

所測定物質的濃度與響應的相關性，用回歸分析方法（如用加權最小二乘法）所得的回歸方程來評價。

標準曲線高低濃度范圍為線性范圍，在線性范圍內濃度測定結果應可達到試驗要求的精密度和準確度。必須用至少5個濃度建立標準曲線，應使用與待測樣品相同生物介質，線性范圍要能覆蓋全部待測濃度，不得用線性范圍外推的方法求算未知樣品的濃度。標準曲線不包括零點。

6，精密度與準確度

要求選擇三個濃度的質控樣品同時進行方法的精密度和準確度考察，低濃度選擇在最低量限（LOQ）附近，高濃度在標準曲線的上限附近，中間選一個濃度，每一濃度至少測定5個樣品。精密度用質控樣品的日內和日間相對標準差（RSD）表示，一般RSD應小于15%，在LOQ附近RSD應小于20%。

準確度是指用特定方法測得的生物樣品濃度與真實濃度的接近程度，可用相對回收率表示，一般應85%~115%范圍內，在LOQ附近應在80%~120%范圍內。

7，樣品穩定性

對含藥生物樣品在冰凍條件下不同存放時間進行穩定性考察，以確定生物樣品的存放時間。,

8，質控樣品

質控樣品系將已知量的待測藥物加入到生物介質中配制的樣品，用于質量控制。一般配制高、中、低三個濃度的質控樣品。

9，質量控制

應在生物樣品分析方法確證完成之后開始測試未知樣品。每個未知樣品一般測定一次，必要時可進行復測。每批生物樣品測定時應建立新的標準曲線，并隨行測定高、中、低三個濃度的質控樣品。質控樣品測定結果的偏差一般應小于20%。

志愿受試者

1，志愿受試者條件

性別：男性；

年齡：18~40歲；

體重：標準體重±10%。 [標準體重=身高(cm)－80]×0.7；或=[身高(cm)－170]×0.6+62。全部受試者的體重盡量控制在55-65kg范圍內；

不吸煙；

不嗜酒；

經病史詢問、全身體檢和實驗室檢查證明健康者；

無藥物過敏史和精神病史；

無藥物依賴史；

至少兩周未服用其它任何藥物；

受試期間禁服任何藥物；

2，受試者例數：20例。

3，分組方案：

4，簽署知情同意書。

參比制劑

Sinofi Pharma 生產的厄貝沙坦片劑，每片150 mg，批號：173

試驗制劑

國產厄貝沙坦膠囊，每粒75 mg，批號：

給藥方案

1、劑量：兩制劑均給150 mg。

2、給藥方案：采用雙周期隨機交叉試驗設計，給藥方案見表2。

3、洗脫期：1周。

4、取血點：服藥前（0小時）、服藥后0.25，0.5，0.75，1，1.5，2，4，8，12，24，36，48，60小時從靜脈采血3 ml。立即離心，血漿儲存在-20°C保存。詳細記錄采血準確時間。