1．取出生后1-3天內的大鼠腦組織后，先仔細剝除腦膜和血管等纖維成分，置入Hanks液中漂洗1～2次后，置于30～50倍體積的Hank液中，腦組織比較柔軟，反復吹打即可制成細胞懸液。
2．為排除脂肪成分和其它碎塊，把懸液注入離心管中，在室溫直立5～10分鐘后，細胞或細胞團塊自然下沉，脂肪等雜物易漂浮于懸液表層，吸除上清，如此反復二三次可獲得較多的細胞成分。
3．向末次沉淀物中加入適量營養液，通過紗網或紗布濾過，計數細胞并調整好細胞密度，接種入培養瓶或皿中，置5％CO2溫箱中培養。
4．細胞生長匯合后，可用0.25％胰蛋白酶消化法做傳代處理，加消化液的量以能覆蓋細胞層即可，待細胞開始從瓶壁脫離（平均5～10分鐘），加入含有血清培養液，吹打制成細胞懸液。