原代腫瘤細胞的選擇性培養：匯合飼養層腫瘤細胞篩選實驗
飼養層技術取決于通過其他接觸抑制細胞形成的單層預防成纖維細胞的過度生長。 飼養層技術并不能選擇性抑制正常上皮細胞， W為正常表皮細胞和正常乳腺上皮都能在 匯合的伺養層上形成克隆。然而，神經膠質瘤研究的結果表明，在同種飼養層上選擇培養等同的正常細胞是可能的。
方案 24.1 匯合飼養層腫瘤細胞篩選實驗
實驗方法原理
在指數生長中期，用絲裂霉素C處理飼養層細胞，將細胞培養形成匯合的單層。通過膠原蛋白酶消化從活檢標本分離腫瘤細胞，或者用胰蛋白酶消化從原代培養物獲得腫瘤細胞，然后將腫瘤細胞接種到匯合的單層上（圖24.1）。上皮性腫瘤細胞可以在3周至3個月內形成克隆。纖維肉瘤和神經膠質瘤并不總是形成克隆，而可侵入飼養層，并逐漸過渡生長。
實驗材料 3T3細胞STO細胞10T1 2 細胞
試劑、試劑盒 生長培養液膠原蛋白酶胰蛋白酶
儀器、耗材 手術刀 Petri 培養皿
實驗步驟
一、材料
無菌
1. 飼養層細胞（如 3T3、STO、10T1/2 或 FHS74Int）
2. 1 mg/ml 絲裂霉素 C（Sigma）
注意：
首次使用飼養層細胞時，最好作絲裂霉素 C 的劑量反應曲線，證實這個劑量能使飼養層細胞存活 2~3 周，但使細胞最多進行兩個倍增后不再繼續增殖。在這種情況下，按如下步驟進行：
（1）將 25 cm2 培養瓶中的細胞用 1~100 μg/ml 絲裂霉素 C 處理過夜（18 h）