一、實驗目的
學習去壁低滲火焰干燥法進行植物有絲分裂染色體制片的基本原理和方法。
二、實驗原理
在各種生長旺盛的植物組織中,如莖尖、根尖、幼葉基部、幼嫩的愈傷組織都進行著細胞的有絲分裂,采取前處理、固定、酶解去壁、后低滲、涂片、火焰干燥、染色等方法,就可以觀察到分散良好的中期分裂相。
三、實驗材料
洋蔥鱗莖或蠶豆種子
四、器具及藥品
恒溫培養箱,顯微鏡,解剖器,白瓷盤,酒精燈,載玻片,秋水仙素,甲醇,冰醋酸,乙醇,纖維素酶,果膠酶,磷酸緩沖液,改良石炭酸品紅或吉姆薩。
五、實驗步驟
㈠取材
將洋蔥的鱗基,置于盛水的小燒杯上,放在25℃溫箱中,待根長到2cm 左右時,在上午九時取根尖。
或將蠶豆種子洗凈,加入50℃的溫水浸泡一天,然后轉入墊有濕潤吸水紙的白瓷盤中,置25℃溫箱中發芽,種子幼根長至1-2cm時,上午9時取根尖。
㈡預處理
將取下的根尖置于0.01%-0.1%的秋水仙素溶液的青霉素瓶中,浸泡處理2-5小時。
㈢固定
經過預處理的根尖,用水洗凈,投入甲醇—冰醋酸(3:1)固定液固定2-24h。其間更換一次固定液。
㈣酶解去壁
從固定液中取出洋蔥或蠶豆根尖,用 蒸餾 水漂洗干凈,切掉多余部分,留下分生區,放入2.5%果膠酶和2.5%的纖維素酶混合液中于27℃溫箱處理2-5小時,直至材料軟化。
㈤后低滲
酶液倒在另一瓶中,材料用 蒸餾 水漂洗干凈,洗5次,最后一次在蒸餾水中浸泡30分鐘。
㈥再固定
倒去蒸餾水,加入甲醇—冰醋酸(3:1)固定液固定10分鐘。
㈦涂片
取根尖置干凈載玻片上,加1-2滴新配固定液,迅速用鑷子夾碎根尖,并敲打成勻漿狀,這一過程固定液不能干,要干時繼續加固定液,然后在酒精火焰上灼燒,呈現雨點狀斑點即可貼上標簽。
㈧染色
將玻片倒扣在墊有枕木的白瓷板上,將磷酸 緩沖液 (PH6.8)與Giemsa原液按20:1混合,從玻片的下面滴在白瓷板上,染色30分,再用蒸餾水沖洗玻片的背面,晾干。
㈨鏡檢
在顯微鏡下仔細觀察,尋找染色體形態清析、染色適中、分散良好的分裂中期相。