去蛋白終點法測定血清肌酐（Cr）實驗

苦味酸溶液氫氧化鈉鎢酸溶液聚乙烯醇濃硫酸

一、實驗試劑：

1. 0.04mmol/L苦味酸溶液：苦味酸(AR)9.3g，溶于500ml蒸餾水中冷卻至室溫。加蒸餾水至1升，用0.1mol/L氫氧化鈉滴定，以酚酞作指示劑，根據滴定用蒸餾水稀釋至0.04mol/L貯存于棕色瓶中。

2. 0.75mmol/L氫氧化鈉：氫氧化鈉(AR)30g，加蒸餾水少許使其溶解，冷卻后用蒸餾水稀釋至1升。

3. 35 mmol/L鎢酸溶液：

① 100ml 蒸餾水中加入1g聚乙烯醇，加熱助溶（不能煮沸）冷卻。

② 300ml 蒸餾水中加入11.1g鎢酸鈉，使完全溶解。

③ 300 ml 蒸餾水中慢慢加入 2.1ml 濃硫酸冷卻。

于 1 升 容量瓶中，將①液加入②液中，再與③混勻。再加蒸餾水至刻度，置室溫保存至少可穩定一年。

4. 10 mol/L肌酐標準貯存液：肌酐（MW，13.12）113mg用0.1mmol/L鹽酸溶解，并移入100ml容量瓶中，再以0.1mol/L鹽酸稀釋至刻度，保存于冰箱內穩定一年。

5. 10μmol/L肌酐標準應用液：準確吸取10mmol/L肌酐標準貯存液1.0ml加入1000ml容量瓶內，以0.1mol/L鹽酸稀釋至刻度，保存于冰箱內。

二、 實驗操作：

于16mm×100mm試管中，置血清（或血漿）0.5ml，加人35mmol/L鎢酸溶液4.5ml，充分混勻。30O0r/min，離心10分鐘，取上清液，按表3-6-4測定

尿液標本用蒸餾水作1:2O0稀釋后，亦按表測定

混合后，室溫放置15分鐘，分光光度計510nm波長，比色杯光徑1.0cm以空白管調零。讀取各管吸光度

三、計算：

血清（漿）肌酐μmol/L=測定管極光度/標準管吸光度×100

尿液肌酐μmol/L=測定管極光度/標準管吸光度×100×200×24小時尿量(L)

參考值：男性44-133μmol/L（0.5-1.5 mg/dL）

女性 70-106μmol/L（O.8-1.2 mg/dL）

1. 溫度升高時，可使堿性苦味酸溶液顯色增深，但標準液與測定的增生程度不成正比例，因此測定各管溫度均需升室溫。

2. 血清（漿）標本如不當時定，可于冰箱保存3天，只能保持較長時間宜-20℃保存，輕微溶血標本對測定肌酐影響，可使肌酐結果偏高。

3. 肌酐測定的回收率受無蛋白溶液的PH影響，溶液PH在3-4.5時，回收率為85-90％ PH2時回收率100%。