在吸附層析中，高極性物質在層析柱上吸附較牢，洗脫時發生拖尾現象和保留時間長的問題。
如果在支持物上涂上一層高碳原子的疏水性強的烷烴類，洗脫液用極性強的溶劑，如甲醇和水的混合物。則被分離樣品中的極性強的物質不被吸附，最先洗下來，得到較好的分離效果。
這種層析法與普通的吸附層析法相反，故稱為反相層析。用HPLC做反相層析常用的ODS柱，即在支持物的表面上連接了C18H37Si—基團。
