一、原理
發根農桿菌是一種寄主范圍非常廣泛的土壤細菌，可以侵染幾乎所有的雙子葉植物和少數單子葉植物。植物傷口感染發根農桿菌后，一到數周出現毛狀根。毛狀根沒有向地性，除菌后在無激素培養基上可迅速生長并產生許多分枝。通過培養可直接從毛狀根上再生植株，或經愈傷組織途徑分化出再生植株。發根農桿菌轉化系統是實現植物基因轉化的又一重要系統。
二、目的
觀察發根農桿菌誘發植物產生毛狀根的過程，掌握發根農桿菌轉化植物的基本方法。
三、材料和試劑
1、煙草實生苗，試管苗，子葉柄，胚軸，葉片，葉柄，莖段等。
2、發根農桿菌野生型菌株。
3、YEB液體、固體培養基。
4、MS液體、固體培養基。
5、微量注射器，塑料袋，解剖刀，無菌牙簽，無菌濾紙。
四、操作步驟
1、將發根農桿菌在YEB平板上劃線培養。
2、挑取單菌落接種于20ml YEB液體培養基中，20℃，200rpm條件下振蕩培養，至OD600值為0.6-0.8。
3、按1％量接種到新鮮的YEB或MS培養液(pH
5.4-5.8)中，需要時也可添加AS（100umol/L）。繼續培養至OD值為0.2左右時，可直接用于接種。或當OD值為0.6-0.8時，將菌液轉入無菌離心管中，4000rpm離心心5分鐘。去除上清液，菌體用新鮮YEB或MS液體培養基稀釋至OD值為0.2后用于侵染（需要時可加入100umol/L的AS）。
4、用解剖刀從實生幼苗或試管幼苗頂端最幼嫩的節間處切除幼苗頂部。用無菌牙簽從YEB平板上挑取少量細菌接種于切口表面，或用微量注射器吸取菌液，將菌液滴在傷口面，也可用針頭刺入葉腋或莖、根的皮層分生組織內，接種極微量的菌液。處理后的實生苗用塑料袋套上，以防傷口干燥。
5、從實生幼苗或試管幼苗上剪取子葉、子葉柄、胚軸或葉片（葉片中是剪2－3個剪口）、葉柄、莖段（實生離體材料需經消毒處理）置無菌小培養皿中，加入適量菌液，輕輕搖動一下，浸泡1－10分鐘（視具體材料而定）。取出置無菌濾紙上吸去多余的菌液，轉入不含激素的MS培養基中進行共培養。
6、將處理后的植株及共培養材料置適宜條件下培養，2－4周后創口面或注射部位開始長出毛狀根。