Invitrogen的:
采用的是Gateway技術:利用λ噬菌體位點特異重組系統的BP和LR雙向反應,首先將PCR產物用傳統方法克隆到Gateway化的入門載體,這個目標基因就可以迅速方便而且定向地重組到任何Gateway化的表達載體上.
優點:
1無需限制酶切、無需連接,只要利用重組酶就可以穿梭于任何 Gateway化的表達載體間,典型的克隆效率高達95%以上,保證正確的方向和閱讀框。
2特別適合研究一個基因在不同表達系統中的表達,對于后續的工作有利。
缺點:
1無論是Gateway還是Topo,封閉的系統僅適用于Invitrogen提供的表達載體,使得適用成本高。而且在啟動子和目的基因間必需插入一段特定的噬菌體重組酶識別序列,對表達的影響不好估計。
2所得的并非都是全長cDNA
有不對之處忘大家指正
Clontech的:
采用的是SMART與Infusion技術:合成引物時兩端對應加入任意一種線性化載體兩端15個堿基,PCR擴增目標基因后就可以利用重組酶直接將目標基因定向重組到任意指定表達載體上的指定位點。
優點:
1采用SMART技術,可以方便的得到全長cDNA.
2開放的技術平臺,任何質粒、任何目的基因都能適用。
3使得PCR產物克隆徹底擺脫了中間載體、重復亞克隆重復篩選的煩惱,一步到位,不受載體和酶切位點的限制,不用連接、補平、磷酸化,也不受PCR產物末端影響,而且速度快(30min),重組效率高達90%。
4在載體啟動子和目的基因之間不會增加額外的堿基,真正精確定向克隆。
5Infusion試劑以凍干形式提供,可以在室溫下保存和運輸,不必擔心運輸過程中的溫度問題。
缺點:
不適用于一對多的克隆,目的基因無法在不同載體間穿梭。針對每個載體均要合成特定的引物進行PCR。
strategen的:
優點
1 放射性同位素可跟蹤實驗進程;
2 有包裝蛋白
缺點
1 放射性的東西可否不用
2 要加接頭,還要磷酸化
clontech 的:
第二鏈的合成有PCR技術,是否會引起堿基突變
Novagen的:
優點
1 提供兩種primer,oligo dT & random primer,可根據目的進行選擇;
2 提供EcoRⅠ/HindⅢ酶切位點,便于定向克隆;
缺點
不知什么原因第二鏈合成效率不高