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  • 發布時間:2019-05-21 11:47 原文鏈接: 各種熒光檢測方法簡介

    1、流式: 優點是速度快,非常適合做大數量統計,且樣品只被檢測一次,完全不用擔心熒光淬滅的問題。 缺點是只能檢測熒光的有無、強度大小,無法提供空間定位信息,無法做熒光定位變化的實驗;由于樣品只被檢測一次,因此無法對同一個樣品進行連續觀察。例如,做膜蛋白定位時會得到這么一個結果——用流式可以檢測出信號,但是用顯微鏡卻看不到東西,排除儀器和濾光片選擇問題,很可能是核的自發熒光或非特異標記造成流式的假陽性結果。

    2、熒光顯微鏡: 剛好與流式互補,可很好地進行空間觀察,判斷目標蛋白的定位,但是不適合做大流量檢測,估計沒人能經得起時間的考驗。有不同倍率的物鏡選擇,可以使用高倍物鏡看精細結構,或用小倍率物鏡做少量統計。與之搭配的CCD和軟件,是系統能否發揮性能的關鍵。尤其是CCD,從那么多商品里選一款合適的不容易,需要了解很多知識否則只能聽別人忽悠。

    3、共聚焦,熒光顯微鏡的升級產品: 具有很好的光學層切效果,能得到很好三維定位信息。但是,如果使用共聚焦的目的僅僅是為你的樣品拍一張靚照,取得一張好看的圖片,就讓人覺得可惜了。共聚焦基本都是全自動系統,可隨意定義照明區域、選擇多個熒光通路和設定定時取圖,所以,做Time-laps、FRAP和FRET有其獨到的優勢。另外,4Pi和STED又是其中的極品,具有超高的空間分辨率,只是使用不方便,未必適合做生物實驗。

    4、全內反射: 熒光顯微鏡的另一種升級產品,屬于近場光學范疇,只適合且最適合做膜研究,無法看到胞內信息。也是用CCD成像,但是對CCD的要求更高——個人甚至覺得對CCD的要求是沒有上限的。

    5、雙光子: 另一種共聚焦,因使用長波激發熒光,故能做深層檢測(突破共聚焦的100微米極限),最典型的應用是觀察活體腦組織。巨貴無比,國內沒有幾臺,能用上的人不多。

    6、新推出的高內涵藥篩系統,流式和顯微鏡的雜合體: 使用電動載物臺,可以自動地按預定程序完成實驗,可做大流量檢測(雖然速度慢點),而且有成像能力,可以判斷定位。


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