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  • 發布時間:2020-08-11 11:01 原文鏈接: 吉姆薩染色實驗

    實驗材料 原位雜交玻片

    試劑、試劑盒 吉姆薩染色液磷酸鈉緩沖液乙醇二甲苯

    儀器、耗材 染色盤培養箱濾紙

    實驗步驟

    1.  將顯影的玻片置于玻片架上,浸入盛有水的染色盤中。


    (1)1個盤:pH6.8 10 mmol/l 磷酸鈉緩沖液,所配的25倍稀釋的吉姆薩染液。


    (2)3個盤:水。


    (3)脫水系列溶液:


    ①3個盤:分別盛50%、70%和95%乙醇。


    ②2個盤:盛有100%乙醇。


    ③3個盤:盛有二甲苯。

     

    3.  在25倍稀釋的吉姆薩染液中染玻片20 s(依染色時間決定染色的強弱),將玻片在水中浸泡3次,每次2 min。


    4.  連續用乙醇脫水系列溶液處理,每盤中浸泡2 min,將玻片移至二甲苯盤中,毎次浸泡2 min,共3次。

     

    5.  在通風櫥中,按如下操作壓片固定:用一平頭鑷(拿在左手),從二甲苯中取出一塊玻片,夾住磨面端置水平。加4滴Permount 的于另一端(切片所處位置),左手拿一干凈的蓋玻片,很緩慢地放在載玻片上(在加壓片固定介質和蓋玻片前,勿使玻片變干,因微小氣泡會造成人為假象)。

     

    6.  用3MM 濾紙,沿蓋玻片邊緣,小心吸去多余固片介質/二甲苯,并擦拭載玻片背面(勿擦拭蓋玻片)。

     

    7.  將玻片平放于一硬紙盒盤上,置42℃溫孵箱2天使之凝固。

     

    8.  以剃須刀片小心刮去載玻片背面殘留膠乳,染料及固片介質。用鏡頭紙或普通棉紙擦去塵埃。放入玻片盒,必要時,載玻片上再注明標簽。


    9.  顯微鏡觀察玻片,觀察時可依信號強弱,調節光亮。


    注意事項


    1.  勿將玻片直立存放于玻片中,因此時固片介質尚未凝結


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