在設計引物時,一對引物兩端分別加了兩個酶切位點,這兩個酶切位點與pEGFP-C1 載體多克隆位點中的酶切位點相吻合,且位置和方向都合適。這樣, 目的基因片段和pEGFP-C1 載體經雙酶切后,由于酶切位點一致,在T4 DNA 連接酶的作用下就可以連接。
DNA 片段
pEGFP-C1 載體限制性核酸內切酶Ligation BufferT4 DNA Ligase
冰盒
1. 雙酶切純化的目的DNA 片段和pEGFP-C1 載體。
反應體系：
反應條件： 37 ℃ 2 hrs 至過夜
2． 回收后電泳檢測濃度， 然后進行連接反應。
反應條件： 室溫2 hrs， 或者4 ℃過夜。
10 ×Ligation Buffer 用之前要震蕩混勻。
