咪唑、尿素怎么配

尿素在純化包涵體時用，一般用8M的尿素加到含有咪唑的磷酸緩沖液中，純化可溶性蛋白時不用加尿素。
洗雜蛋白時咪唑的濃度一般是20mM。洗脫目的蛋白時咪唑濃度在500mM時能將大部分蛋白都洗脫下來，如果想讓蛋白純度高的話，可以用不同的咪唑濃度，設置成梯度進行洗脫，我們實驗室一般是80mM，100mM，200mM，500mM，但是用梯度洗脫有個缺點就是可能你的目的蛋白被稀釋，濃度降低。