實驗方法原理 取出器官或組織，將其切成 1 mm3 小塊或成薄膜狀、桿狀。然后，將組織放在位于氣液界面的支持物上，如濾膜培養皿。在濕潤的 CO2 培養箱中培養，根據需要更換培養液。
試劑、試劑盒 M199
儀器、耗材 解剖器械濾膜培養皿12 孔培養板受精雞蛋
實驗步驟
一、材料
無菌
1. 解剖器械
2. 含有或不含有血清的培養液（如 M199）
3. 非組織培養處理的濾膜培養皿（如 Costar Transwell 聚碳酸酯，#3423，Corning）
4. 12 孔的培養板（Corning）
非滅菌
1. 已受精的雞蛋，孵育 8 d
二、操作步驟
1. 將濾膜培養皿放在多孔培養板的各個孔內，加入培養液直至達到濾膜底面水平（約 1 ml）。
2. 將多孔培養板放入濕潤的 37°C 恒溫 CO2 培養箱中，以調整培養液的 pH。
3. 準備組織或切出整個胚胎器官（如 8 d 雞胚的股骨或脛骨；見方案 12.2 和方案 12.7）。在一個緯度，組織厚度必須不超過 1 mm，最好更小（如 8 d 胚的脛骨長度可能達 5 mm，但直徑僅 0.5~0.8 mm。皮膚小塊可為 10 mm2，但厚度僅為 200 μm。必須切成小塊的組織不應大于 1 mm3，如肝或腎）。
4. 在短時間內解剖標本（＜ 1 h），HBSS 要充足。但是，較長時間解剖時應在以 HEPES 緩沖為 pH7.4 的 HBSS 中添加 50% 血清。
5. 從培養箱中取出多孔板，小心地將組織轉移到濾膜上。這一步最好用 Pasteur 吸管完成，可同時吸出隨組織塊轉移出的液體，應小心不要刺破濾膜。在吸取前，先用培養液濕潤吸管內壁，以防止吸取時組織塊黏到吸管壁上。
6. 檢查培養液的水平，確認將組織浸濕，但沒有完全浸沒。然后，將培養板放回培養箱中。
7. 2~4 h 后再次檢查，確保培養液面保持在濾膜和組織塊之上，但深度不足以使組織塊浮起。
8. 將組織培養 1~3 周，根據樣本需要，每隔 2~3 d 更換培養液 1 次。
