實驗方法原理
痘苗病毒可以在 HeLa S3 細胞中大量繁殖，其他的細胞系可用于噬斑純化和擴增。
實驗材料 重懸重組噬斑貼壁生長良好的細胞HeLa S3 細胞
試劑、試劑盒 完全 MEM-10 和 MEM-2.5 培養基篩選試劑（麥考酚酸 黃嘌呤／次黃嘌呤）5-溴脫氧尿苷（BrdU）干冰／乙醇
儀器、耗材 杯狀超聲儀5 ml錐形離心管Sorvall 離心機（或相當的離心機）150 cm2 組織培養瓶
實驗步驟
實驗試劑準備詳見「其他」。
1. 將重懸的重組噬斑置于含有冰水的杯狀超聲儀上，以最大的功率超聲 20～30 s。
2. 每個噬斑取 250μl （1/2） 感染 12 孔組織培養板中匯片生長的單層細胞。培養 1～2 h，每隔 15 min 輕輕搖動一次。
3. 用 1 ml 含有合適篩選試劑的完全 MEM-2.5 培養基覆蓋細胞。
3 .1 對于 XGPRT 篩選，含有 1/400 體積的 10 mg/ml MPA、1/40 體積的 10 mg/ml 黃嘌呤、1/670 體積的 10 mg/ml 次黃嘌呤。
3.2 對于 TK 篩選，含有 1/200 體積 5 mg/ml BrdU。培養 2 天或者直到細胞病變（細胞變圓）明顯。
4. 用細胞刮刀輕輕刮下細胞，轉移到微量離心管中，最大轉速，離心 30 s，棄培養基。
5. 將細胞用 0.5 ml MEM-2.5 培養基重懸。反復凍融法裂解細胞懸液：用干冰/乙醇將細胞凍結，再用 37℃ 水浴及渦旋使細胞解凍。如此進行 3 次。
6. 將重懸的細胞懸液置于冰上，在杯狀超聲儀上以最大功率超聲 20～30 s。
7. 用 0.75 ml 含有篩選試劑的完全 MEM-2.5 培養基（見步驟 2 和 3） 稀釋 0. 25 ml 來自步驟 6 的裂解液，感染 25 cm2 組織培養瓶中匯片生長的單層細胞，培養 30 min。
8. 用 4 ml 含有適當篩選試劑的完全 MEM-2.5 培養基（見步驟 3） 覆蓋細胞。培養 2 天或者直到細胞病變（細胞變圓）明顯。
9. 用細胞刮刀輕輕刮下細胞，轉移到 15 ml 錐形離心管中，5～10℃，1800 g 離心 5 min，棄培養基。細胞用 0.5 ml MEM-2.5 培養基重懸。按照步驟 5 和 6 的方法反復凍融法裂解細胞懸液和超聲。
10. 用血細胞計數器對旋轉培養瓶培養的 HeLa S3 細胞進行細胞計數。
11. 將 5 ×107 個細胞在離心機中室溫 1800 g 離心 5 min，棄上清。
12. 將細胞懸浮于 25 ml 完全 MEM-10 培養基中，放入 150 cm2 組織培養瓶中，培養過夜（第二天進行感染）。
13. 吸出培養基，加入 0.25 ml 的細胞裂解液（步驟 9）和 1.75 ml 完全 MEM-2.5 培養基。培養 1 h，每隔 15～30 min 輕輕搖動一次。
14. 加入 25 ml 完全 MEM-2.5 培養基（此步驟不需要篩選），培養 3 天。
15. 使細胞與培養瓶分離（如果需要可以借助搖晃或細胞刮刀），用吸管將細胞懸液轉移到離心管中，于 5～10℃，1800 g 離心 5 min，棄培養基。
16. 細胞用 2 ml MEM-2.5 培養基重懸。按照步驟 5 的方法反復凍融裂解細胞懸液。
17. 測定病毒儲液的滴度，再將其存放于 -70℃。
注意事項
如果用 XGPRT 篩選，貼壁培養的細胞先用含有麥考酚酸、黃嘌呤、次黃嘌呤的完全 MEM-2.5 培養基預培養 12～24 h （見「重組細胞篩選實驗」步驟 4.1）。感染也必須在這些試劑存在的條件下進行。
其他
完全 MEM-10 和 MEM-2.5 培養基
篩選試劑（XGPRT 篩選；抽濾除菌，-20℃ 保存）：
10 mg/ml （400 ×）麥考酚酸（MPA； Calb10chem），溶于 0.1 mol/L NaOH；
10 mg/ml （40 ×）黃嘌呤，溶于 0.1 mol/L NaOH；
10 mg/ml （670 ×）次黃嘌呤， 溶于 0.1 mol/L NaOH
5 mg/ml 5-溴脫氧尿苷（BrdU），溶于水（TK篩選；抽濾除菌，-20℃保存）
干冰/乙醇