四大酵母培養基的配置原理和方法

實驗概要

了解合成培養基、半合成培養基和天然培養基的配制原理。學習和掌握麥芽汁培養基、馬鈴薯葡萄糖培養基、豆芽汁葡萄糖培養基和察氏培養基的配制方法。

實驗原理

麥芽汁培養基和馬鈴薯葡萄糖培養基被廣泛用于培養酵母菌和霉菌。馬鈴薯葡萄糖培養基有時也可用于培養放線菌。豆芽汁葡萄糖培養基也是培養酵母菌及霉菌的一種優良培養基。察氏培養基主要用于培養霉菌觀察形態用。麥芽汁培養基為天然培養基，馬鈴薯葡萄糖培養基和豆芽汁葡萄糖培養基二者均為半合成培養基，而察氏培養基則為合成培養基。培養基配方中出現的自然pH系指培養基不經酸、堿調節而自然呈現的pH。 

主要試劑

1. 葡萄糖

2. 蔗糖

3. NaN0₃

4. K₂HP0₄

5. KCl

6. MgSO₄·7H₂O

7. FeS0₄

8. 瓊脂 

9. 新鮮麥芽汁、黃豆芽、馬鈴薯等

主要設備

1. 儀器：天平、高壓蒸汽滅菌鍋。

2. 玻璃器皿：移液管、試管、錐形瓶、燒杯、量筒、培養皿、玻璃漏斗等。

3. 其他物品：藥匙、pH試紙、稱量紙、記號筆、棉花、紗布、線繩、塑料試管蓋、牛皮紙、報紙等。

實驗步驟

1. 麥芽汁培養基的配制 

   1) 培養基成分  
新鮮麥芽汁一般為10-15波林。 

   2) 配制方法   

      a. 用水將大麥或小麥洗凈，用水浸泡6-12h，置于15℃陰涼處發芽，上蓋紗布，每日早、中、晚淋水一次，待麥芽伸長至麥粒的兩倍時，讓其停止發芽，曬干或烘干，研磨成麥芽粉，貯存備用。   
      b. 取一份麥芽粉加四份水，在65℃水浴鍋中保溫3-4h，使其自行糖化，直至糖化完全(檢查方法是取0.5ml的糖化液，加2滴碘液，如無藍色出現，即表示糖化完全)。   
      c. 糖化液用4-6層紗布過濾，濾液如仍混濁，可用雞蛋清澄清(用一個雞蛋清，加水20 ml，調勻至生泡沫，倒入糖化液中，攪拌煮沸，再過濾)。   
      d. 用波美比重計檢測糖化液中糖濃度，將濾液用水稀釋到10-15波林，調pH至6.4。如當地有啤酒廠，可用未經發酵，未加酒花的新鮮麥芽汁，加水稀釋到10-15波林后使用。   
      e. 如配固體麥芽汁培養基時，加入2％瓊脂，加熱融化，補充失水。   
      f. 分裝、加塞、包扎。   
     g. 高壓蒸汽滅菌  100 Pa滅菌20 min。 

2. 馬鈴薯葡萄糖培養基的配制

   1) 培養基成分  
　　馬鈴薯　　　20g  
　　葡萄糖　　　2 g  
　　瓊脂　　　　1.5-2g  
　　水　　　　　100ml  
　　自然pH

   2) 配制方法
      a. 配制20％馬鈴薯浸汁  取去皮馬鈴薯200g，切成小塊，加水1000ml。80℃浸泡lh，用紗布過濾，然后補足失水至所需體積。100 Pa滅菌20 min。即成20％馬鈴薯浸汁，貯存備用。   
      b. 配制時，按每100 ml馬鈴薯浸汁加入2g葡萄糖，加熱煮沸后加入2g瓊脂，繼續加熱融化并補足失水。   
      c. 分裝、加塞、包扎。   
      d. 高壓蒸汽滅菌  100 Pa滅菌20 min。

3. 豆芽汁葡萄糟培養基的配制  

   1) 培養基成分   
　　黃豆芽　　　10g  
　　葡萄糖　　　5g  
　　瓊脂　　　　1.5-2g  
　　水　　　　　100ml  
　　自然pH 

   2) 配制方法
      a. 稱新鮮黃豆芽10g，置于燒杯中，再加入100 ml水，小火煮沸30 min，用紗布過濾，補足失水，即制成10％豆芽汁。  
      b. 配制時，按每100 ml10％豆芽汁加入5g葡萄糖，煮沸后加入2 g瓊脂，繼續加熱融化，補足失水。   
      c. 分裝、加塞、包扎。   
      d. 高壓蒸汽滅菌  100 Pa滅菌20 min。

4. 察氏(czapck)培養基的配制

   1) 培養基成分  
　　蔗糖　　　　　　　3g  
　　NaN0₃　　　　　0.3g  
　　K2HP0₄  　　　　0.1g  
　　KCl 　　　　　　 0.05g  
　　MgSO₄·7H₂O    　0.05 g  
　　FeS0₄ 　　　　　0.001 g  
　　瓊脂　　　　　　1.5-2g  
　　蒸餾水　　　　　100ml  
　　自然pH    
    2) 配制方法
      a. 稱量及溶化  量取所需水量約2／3左右加入到燒杯中，分別稱取蔗糖、NaNO₃ 、K₂HP0₄ 、KCl、MgSO₄。依次逐一加入水中溶解。按每100 ml培養基加入1ml 0.1％的FeS0₄溶液。  
      b. 定容  候藥品全部溶解后，將溶液倒入量筒中，加水至所需體積。  
      c. 加瓊脂  加入所需量瓊脂，加熱融化，補足失水。  
      d. 分裝、加塞、包扎。  
      e. 高壓蒸汽滅菌 100 Pa滅菌20 min。