采用ODS分離柱(250 mm×4.6 mm i.d.)、恒組成流動相(8.5% CH3CN-33 mmol·L-1磷酸緩沖液,pH=3.0)并結合熒光檢測的高效液相色譜(HPLC)技術,可以對生物體內重要的葉酸存在形態,四氫葉酸和5-甲基四氫葉酸進行分析定量;將這種檢測方法應用于亞甲基四氫葉酸還原酶和甲硫氨酸合成酶的活性分析,不需要使用放射性同位素,并且具有檢測靈敏度高、特異性強、重復性好、操作簡單迅速的特點.使用抗壞血酸、巰基乙醇或二硫蘇糖醇,在檢測過程中葉酸化合物和酶保持穩定;反應體系中也沒有任何試劑會干擾反應產物四氫葉酸和5-甲基四氫葉酸的HPLC檢測.
體內葉酸經葉酸還原酶的還原作用和維生素Bi2的催化作用后變成四氫葉酸，后者是DNA合成過程中必需的輔酶。因此，維生素B12或葉酸缺乏都可致四氫葉酸減少，進而引起DNA合成減少。幼稚紅細胞內的DNA合成減少使其分裂和增殖時間延長，導致細胞核的發育落后于胞漿(血紅蛋白的合成不受影響)的發育，使紅細胞的胞體變大，形成巨幼紅細胞。由于紅細胞生成速度慢，加之異形的紅細胞在骨髓內易被破壞，進入血循環的成熟紅細胞壽命也較短，從而造成貧血。
