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  • 發布時間:2019-08-02 23:49 原文鏈接: 地衣酚顯色法測定RNA含量

    原理 
    核糖核酸與濃鹽酸共熱時,即發生降解,形成的核糖繼而轉變為糠醛,后者與3,5-二羥基甲苯(地衣酚)反應呈鮮綠色,該反應需用三氯化鐵或氯化銅作催化劑,反應產物在670nm處有最大吸收。RNA在20~250μ g范圍內,光吸收與RNA的濃度成正比。地衣酚反應特異性較差,凡戊糖均有此反應,DNA和其他雜質也能給出類似的顏色。因此測定RNA時可先測定DNA含量,再計算出RNA含量 。 
      
    操作方法 
    一、RNA標準曲線的制定 
    取10支試管,分成2組,依次加入0.5、1.0、1.5、2.0和2.5mLRNA標準溶液。分別加入蒸餾水使最終體積為2.5mL。另取2支試管,各加入2.5mL水作為對照。然后各加入2.5mL地衣酚試劑。混勻后,于沸水浴內加熱20分鐘。取出冷卻(自來水中)。于670nm波長處測定光吸收值。取兩管平均值,以RNA濃度為橫坐標,光吸收值為縱坐標作圖,繪制標準曲線。 

    二、制品的測定 
    取2支試管,各加入2.5mL待測液,(樣品量應在標準曲線的可測范圍之內),再加2.5mL地衣酚試劑。如前所述進行測定。 

    三、RNA含量的計算 
    根據測得的光吸收值,從標準曲線上查出相當該光吸收值的RNA含量。按下式計算出制品中RNA的百分含量:

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