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  • 發布時間:2020-09-15 11:51 原文鏈接: 培養基的配制及高壓蒸汽滅菌1

    培養基是人工地將多種物質按各種微生物生長的需要配制而成的一種混合營養基質,用以培養或分離各種微生物。因此,營養基質應當有微生物所能利用的營養成分(包括碳源、氮源、能源、無機鹽、生長因素)和水。根據微生物的種類和實驗目的不同,培養基也有不同的種類和配制方法。
      一、按成分的不同分
      1.天然培養基
      主要成分是復雜的天然有機物質,如馬鈴薯、豆芽汁、牛肉膏、蛋白胨、血清等。這些復雜天然有機物質的成分不完全了解,每次所用的原料,其中各成分的數量也不恒定。這類培養基是實驗室常用的培養基,例如牛肉膏蛋白胨培養基、馬鈴薯培養基等。
      2.合成培養基
      用化學成分完全了解的純試劑配制而成的培養基,如高氏1號培養基,查氏培養基等。一般用于營養代謝、分類鑒定、菌種選育、遺傳分析等。
      二、按培養基的物理狀態分
      1.固體培養基
      在液體培養基中加入凝固劑即為固體培養基。實驗用的凝固劑有瓊脂、明膠和硅膠,后者用于配制自養微生物的固體培養基。對其他多數微生物來講,以瓊脂最為合適,一般加入1.5―2.5%即可凝固成固體。此培養基可供分離、鑒定、活菌計數、菌種保藏等用。
      2.半固體培養基
      在液體培養基中加入少量凝固劑即為半固體培養基,例如瓊脂只需加入0.2―0.7%。常用作細菌動力檢查和菌種保存、噬菌體制劑的制備等。
      3.液體培養基
      沒有加瓊脂,配好后成液體狀態的培養基。常用于生理代謝的研究和工業發酵等。
      三、按培養基的用途分
      1.基礎培養基
      含有一般細菌生長繁殖需要的基本的營養物質。最常用的基礎培養基是上面提及的天然培養基中的牛肉膏蛋白胨培養基。這種培養基可作為一些特殊培養基的基礎成分。
      2.營養培養基(加富培養基)
      在基礎培養基中加入某些特殊營養物質,如血液、血清、酵母浸膏或生長因子等。用以培養對營養要求高的微生物,如培養百日咳桿菌需要含有血液的培養基。
      3.鑒別培養基
      是一類含有某種特定化合物或試劑的培養基。某種微生物在這種培養基上培養后,它所產生的某種代謝產物與這種特定的化合物或試劑能發生某種明顯的特征性反應,根據這一特征性反應可以將某種微生物與其他種微生物區別開來。主要用于不同類型微生物的快速鑒定,如用來檢查細菌能否產生硫化氫的醋酸鉛培養基。
    4.選擇培養基
      利用微生物對某種或某些化學物質的敏感性不同,在培養基中加入這類物質,抑制不需要的微生物生長,而利于所需分離的微生物生長,從而達到分離或鑒別某種微生物的目的,如分離真菌的馬丁氏培養基。既有選擇作用又有鑒別作用的培養基,如鑒別腸道桿菌的遠藤氏培養基等。
      微生物的生長繁殖除需要一定的營養物質以外,還要求適當的pH范圍。不同微生物對pH的要求不一樣,霉菌和酵母菌的培養基的pH是偏酸性的,而細菌和放線菌的培養基的pH為中性或微堿性的。所以配制培養基時,都要根據不同微生物對象用稀酸或稀堿將培養基的pH調到合適的范圍。但配制pH低的瓊脂培養基時,如預先調好pH并在高壓蒸汽下滅菌,則瓊脂因水解不能凝固,因此,應將培養基的成分和瓊脂分開滅菌后再混合,或在中性pH條件下滅菌后,再調整pH。


    此外,由于配制培養基的各類營養物質和容器等含有各種微生物,因此,已配制好的培養基必須立即滅菌,以防止其中的微生物生長繁殖而消耗養分和改變培養基的酸堿度而帶來不利的影響。
    牛肉膏蛋白胨培養基的制備
    一、目的要求
    1.明確培養基的配制原理;
    2.通過對基礎培養基的配制,掌握配制培養基的一般方法和步驟;
    3.了解高壓蒸氣滅菌的基本原理以及應用范圍;
    4.學習高壓蒸氣滅菌的操作方法。
    二、基本原理
    牛肉膏蛋白胨培養基的一種應用最廣泛和最普通的細菌基本培養基,有時又稱普 通培養基,基礎培養基含有牛肉膏,蛋白胨和NACL,其中牛肉膏為微生物提供碳源 、 能源、磷酸鹽和維生素,蛋白胨主要提供氮源和維生素,而NACL提供無機鹽。在配制固體培養 基時還要加入一定量瓊脂作凝固劑.多用于培養基細菌,因此要用稀酸和稀堿將其pH調至中性微堿性,以利于細菌的生長繁殖。
    高壓蒸氣滅菌是將待滅菌的物品放在一個密封的加壓滅菌鍋內,通過加熱,使滅菌隔套間的水沸騰而產生蒸氣.待水蒸氣急劇的將冷空氣從排氣中驅除盡 ,然后關閉排氣,繼續加熱,此時由于蒸氣不能溢出,而增加了滅菌器內的壓力,從而使沸點增高,得到高于100°C的溫度 ,導致菌體蛋白凝固變性而達到滅菌的目的。
    三、器材
    1.溶液或者試劑 牛肉膏 蛋白胨 NaCl 瓊脂 1mol/L NaOH 1mol/L HCl
    2.儀器或其他用具 試管 三角形 燒杯 量杯 玻棒 培養基分裝器 天平 牛角匙 pH試紙 棉花 牛皮紙 記號紙 麻繩 紗布 培養皿 手提式高壓蒸氣滅菌鍋等
    四、操作步驟
    1.稱量
    按培養基配方比例依次準確稱取牛肉膏,蛋白胨, NaCl放入燒杯中,牛肉膏常用玻棒挑取,放在小燒杯或表面皿稱量,用熱水溶化后倒入燒杯,也可放稱量紙上,稱量后直接放入水中,這時如稍微加熱,牛肉膏便會與稱量紙分離,然后立即取出紙片;
    2.溶化
    在上述燒杯中先加入少于所需要的水量,用玻璃搖勻,然后,在石棉網上加熱使其溶解,或在磁力攪拌溶解。將藥品完成溶解后,補充水到所需總體積,如果配制固體培養基,將稱好的瓊脂放入已溶的藥品中,再加熱溶化,最后補足所損失的水分;
    3.調pH
    在未調pH前,先用精密pH試紙測量培養基的原始pH,如果偏酸,用滴管向培養基中滴加入1mol/L NaOH,邊加邊攪拌,并隨時用pH試紙測其pH,直至pH達7.6.反之 ,用1mol/L HCl進行調節


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