4、培養后的OD值。其實這并一個非常重要的參數，只是當OD值大到一定的程度后，菌體要保持對數生長已經不太可能，因此很多指導方法上強調OD不得大于0.6，0.8等等。同時，OD值大時菌體總量大，因而感受態絕對數量要大一點，因而需要在OD值的兩方面影響中找一個平衡點。
5、培養基中的各種離子。經驗證明，當培養基中存在一定量的Mg2 離子時，該方法制得的感受態要相對較高。在制備普通感受時，使用20mM MgCl2做為培養基的添加物，在感受態收獲之前20-30分鐘加入，會收到很好的效果。
6、培養溫度。文獻及經驗告訴我們，較低的溫度培養有利于感受態的形成，這樣可以獲得較高的感受態，但太低又不實用，因而產生了Inoue的高效感受態制備方法，它實際是利用了所有有利于感受態的文獻而得出的一個非常理想方法。
7、此外文獻報道，在保存感受態時，DMSO要比甘油的效果要好，它會使感受態的效率增加。
8、液氮速凍也會使感受態的效率提高，因此推薦用液氮速凍感受態，然后保存于超低溫冰箱內。至于在液氮中保存12小時以后再轉入超低溫冰箱，這點未做實驗，只是一種感覺，第一次這樣做了，沒問題，以后就照此辦理而已。
方法二
1.液氮或低溫冰箱中取出的大腸桿菌*E.COLI DH5，JM109，HB101等，在LB平板上劃線，37度過夜至長出單菌落。
2.挑直徑1-3毫米的單菌落*可多個，接種到250毫升/3升錐形瓶 或80毫升/1升錐形瓶的SOB培養基. 培養基量不可再多，會影響效率。
3.在18度150-250RPM 培養19-50小時*沒有冷卻搖床的可在室溫，但不可高于37度。
4.OD600約0.4-0.8時停止培養，放在冰水中冷卻10分鐘。
5. 4度，300RPM離心15分鐘，回收菌體。
6.去掉上清后，用1/3體積的冰冷TB溶液懸浮，在冷10分鐘。
7.再次離心回收菌體。
8.用1/12.5體積的TB懸浮，添加最終濃度為7%的DMSO，再冷卻10分鐘。
9.0.1 -1毫升分裝，直接在液氮中凍上。
10.在液氮或-80度保存。
【zihudie 】
（1）將置于液氮保存的大腸桿菌劃線在LB平板上，37℃培養活化。
（2）挑取經活化的大腸桿菌單菌落于SOC液體培養基，18℃，200-250rpm培養。
（3）當OD600=0.5-0.8時，用預冷的40mL離心管于4℃，8000rpm離心10min，收集菌體。
（4）用預冷的TB Buffer重懸菌體，4℃，8000rpm離心10min，收集菌體。
（5）重復第4步操作。
（6）用8mL預冷的TB Buffer重懸菌體，緩慢加入DMSO至終濃度7% 。
（7）冰浴10min后，分裝保存于液氮中。
本法效率極高，建議大家采納
【yog】
1. 單菌落-------2ml LB 37度 120RPM過夜------1%轉接-------37度 200RPM2小時(OD到0.4~0.5)
2. 2ml，冰浴15min，4度，6000RPM 5min，棄上清，懸浮于1ml0.1MCaCl2 中，冰浴20min
3. 4度，6000RPM 10min，重懸浮于200μl0.1MCaCl2中，冰浴30min
建議用TSS法，簡單方便，比氯化鈣法的轉化效率高.別的菌可能不一定適用。
以下為轉貼，具體方法請最好查閱文獻。
E.coli感受態細胞制備方法:
單菌落平板至2ml LB，37℃ 250 r/m，1ml 轉至50 ml LB，37℃ 250 r/m至 A600=0.2-0.4
離心后用10毫升TSS重懸后，分裝 -70℃保存。盡量冰上操作.
轉化: 加質粒(<5 ul/100μlcell) 后冰上30分鐘，42℃ 90秒，冰上2分鐘，加LB至1ml，37℃ 1小時后鋪抗生素平板。
TSS:
7.0ml pH6.1 LB
2.0ml 50% PEG6000
0.5ML dmso
0.2ML Mg2 (0.1ml 1mol/l MgCl2 and 0.1ml 1mol/l MgSO4)
0.3ml ddH2O