| 實驗步驟 | 注意：由于基因槍通過高壓使粒子加速到極高的速度，故操作基因槍時應采取適當的安全措施并且佩戴安全眼鏡。
在任何使用基因槍轉化的實驗中，必須設置對照檢測分化和選擇效率（見注 40) 。
( 1 ) 根據 PDS-1000/He (見圖 4.2 ) 基因槍操作指南操作，將 DNA 包埋的金粉 ( 見第 3.2 節步驟 2 ) 轉到組織中。下面的參數是按照標準設置的（見注 41) 。距離 2.5 cm（破裂盤到載體膜之間距離），阻擋板孔徑 0.8 cm （載體膜到終止屏之間的距離），目標距離 5.5 cm（終止屏到被轟擊樣品平板距離），真空度 91.4~94.8 kPa，真空流速 5.0，排氣流量 4.5 [ 8]。
( 2 ) 用 90% 乙醇對基因槍表面及樣品室進行消毒，使乙醇能夠完全蒸發。
( 3 ) 用無水乙醇浸沒載體膜及其固定器、終止屏和破裂盤。放置在超凈臺使乙醇完全揮發（注 42) 。將載體膜放置在固定器中，然后放在無菌的 6 cm 培養皿中。
( 4 ) 短暫渦旋混勻金粉-DNA 復合體顆粒（見第 3.2 節步驟 2 ) ，取出 5 μl 點在載體膜中央，晾至完全干燥。注意自然干燥，不要在超凈臺中干燥（見注 43 ) 。
( 5 ) 將破裂盤（650 psi 或 950 psi) 放在破裂盤擋蓋中間（圖 4.2 ) 擰到氣體加速器上，用專用板擰緊（見注 44) 。
( 6 ) 將終止屏放在固定巢內。把載體膜固定器反過來，含有金粉-DNA 復合體的一面朝下放在終止屏上方，使用固定環保持其位置。將固定巢裝在第二個架子上，使其距離頂部大約 2.5 cm (見圖 4.2) 。
( 7 ) 將樣品放在轟擊室中適當的位置，第四個架子距離上方大約 5.5 cm。
( 8 ) 抽真空，當真空度達到 91.4~94.8 kPa 時，激發（見注 45) 。
( 9 ) 轟擊后，釋放轟擊室真空，取出樣品和拆卸裝置，丟棄破裂盤和載體膜（見注 46) 。
( 1 0 ) 如果要接著使用，將載體膜固定器和終止屏用無水乙醇滅菌； 或者將它放入 1：10 稀釋的消毒液（Novartis Consumer Health, West Sussex， UK) 浸泡。使用前用超聲波處理 10 min (見注 47 ) 。 展開 |
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