酪氨酸與色氨酸照高效液相色譜法(通則0512)測定供試品溶液精密量取本品3ml,置100m量瓶中,用流動相稀釋至刻度,搖勻。對照品溶液分別取酪氨酸對照品與色氨酸對照品適量,精密稱定,加0.0 Imol/鹽酸溶液使溶解并稀釋制成毎lml中含酪氨酸0.175mg與色氨酸0.65mg的溶液,精密量取3ml,置50ml量瓶中,用流動相稀釋至刻度,搖勻。色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇水(10:90)(含0.008mol/L的磷酸二氫鉀)為流動相;檢測波長為280nm;進樣體積20l系統適用性要求理論板數按色氨酸峰計算不低于4000,各峰間的分離度應符合要求測定法精密量取供試品溶液與對照品溶液,分別注人液相色譜儀,記錄色譜圖。按外標法以峰面積計算。半胱氨酸對照品溶液取半胱氨酸對照品適量,精密稱定,加水溶解并定量稀釋制成每1ml中約含1mg的溶液。測定法精密量取本品與對照品溶液各1ml,分別置100ml量瓶中,各加甲酸1.5ml與30%過氧化氫溶液1ml,放置30分鐘,用水稀釋至刻度,搖勻,用適宜的氨基酸分析儀進行測定,計算。其他氨基酸采用適宜的氨基酸分析法或照高效液相色譜法(通則0512)測定。內標溶液取正亮氨酸適量,加水溶解并定量稀釋制成每1ml中約含0.8mg的溶液,搖勻供試品溶液精密量取本品3ml,置50ml量瓶中,用水稀釋至刻度,搖勻,精密量取3ml,置10ml量瓶中,精密加入內標溶液2m1l,用水稀釋至刻度,搖勻對照品溶液取異亮氨酸對照品約50mg、亮氨酸對照品約100mg、醋酸賴氨酸對照品約100mg、甲硫氨酸對照品約30mg、苯丙氨酸對照品約80mg、蘇氨酸對照品約55mg、纈氨酸對照品約40mg、丙氨酸對照品約55mg、精氨酸對照品約70mg、門冬氨酸對照品約35mg、谷氨酸對照品約55mg、組氨酸對照品約50mg、脯氨酸對照品約30mg、絲氨酸對照品約mg與甘氨酸對照品約90mg,精密稱定,置同一250ml量瓶中,加水適量使溶解并稀釋至刻度,搖勻;精密量取5ml,置loml量瓶中,精密加入內標溶液2ml,用水稀釋至刻度,搖勻。色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以lmol/L醋酸鈉溶液(用稀醋酸調節pH值至6.5)-乙腈(93:7)為流動相A,以乙腈-水(80:20)為流動相B,進行梯度洗脫;柱溫為40℃;檢測波長為25nm;進樣體積2pl時間(分鐘)流動相A(%)流動相B(%)07232.035.01371145.00系統適用性要求各峰間的分離度應符合要求。測定法精密量取供試品溶液與對照品溶液各2ml,分別置20ml具塞試管中,精密加1mol/L三乙胺溶液-乙腈(14:86)lml,0.lmol/L異硫氰酸苯酯乙腈溶液1ml,搖勻,在50℃水浴中反應45分鐘,取出,放冷,再分別精密加正己烷1ml,搖勻,放置30分鐘后(溶液至澄清),取澄清的下層液,分別注入液相色譜儀,記錄色譜圖。按內標法以峰面積計算。