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  • 發布時間:2020-09-14 17:27 原文鏈接: 多克隆抗體制備

    1. 免疫動物:兩只新西蘭兔
     
    2. 佐劑:首先用完全弗氏佐劑(CFA),后用不完全弗氏佐劑(IFA)。
     
    3. 免疫原:蛋白或KLH偶聯的多肽。每次免疫100-200μg免疫原。
     
    4. 免疫:用生理鹽水稀釋免疫原,然后與相應的佐劑進行1:1混合。抗原和佐劑完全混合形成穩定的乳劑,將該乳劑在兔子雙肩周圍的皮膚下進行皮下注射和后大腿進行肌肉注射。每個區域大約用1/4的免疫原。這樣免疫原可以持久存在從而提高免疫應答。
     
    5. 取血:用19號針頭對兔子進行耳動脈取血,室溫過夜析出血清。
     
    6. 第0星期 采血2ml(獲得0.5-1ml免疫前血清)
     
    完全弗氏佐劑(CFA)混合的200μg抗原免疫兔。
     
    第2星期
     
    完全弗氏佐劑(CFA)混合的200μg抗原免疫兔。
     
    第4星期
     
    不完全弗氏佐劑(IFA)混合的100μg抗原免疫兔。
     
    第5星期
     
    取檢測血清20-30ml
     
    取適當的細胞或組織進行ELISA和WB檢測,
     
    溶解在生理鹽水中的100μg抗原免疫兔。
     
    第6星期
     
    如果檢測陽性第一次采血20-30ml,
     
    溶解在生理鹽水中的100μg抗原免疫兔;
     
    如果上次檢測是陰性,取適當的細胞或組織進行ELISA和WB檢測。
     
    第7星期
     
    第二次采血20-30ml,
     
    溶解在生理鹽水中的100μg抗原免疫兔;
     
    如果檢測仍為陰性,需要討論這個項目是否繼續。
     
    第8星期
     
    第三次采血20-30ml,
     
    溶解在生理鹽水中的100μg抗原免疫兔。
     
    第9星期
     
    末次放血20-30ml,
     
    純化混合血樣,平均每次純化可以獲得100-150mg抗體,最后進行ELISA和WB等質量檢測。
     
    7. 注意:在整個項目中,兔子需要保持9周的免疫和放血。檢測的結果將決定這個項目的繼續、修改或終止

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