實驗概要
采用TAKARA的試劑提取水稻胚乳,主要是后期的胚乳RNA量偏少,不易提取!
實驗步驟
1. 稱量100mg的新鮮或者超低溫凍結的植物RNA提取樣品,迅速轉移至用液氮預冷的研缽中,用研杵研磨組織,其間不斷加入液氮,直至研磨成粉末狀。
2. 向研缽中加入1000μL RNAiso-mate for Plant Tissue(TAKARA),將樣品完全覆蓋,然后室溫靜置,至樣品完全融化,再用研杵繼續研磨至裂解液成透明狀。
3. 將勻漿液轉移至1.5ml的離心管中,12,000g 4℃離心5min。
4. 小心吸取上清液,平均分至2個新的1.5ml離心管中。分別向上清液中加入等體積的RNAiso Plus(TAKARA),蓋緊離心管用力振蕩,待充分乳化后,室溫靜置5min。
5. 向混合液中加入1/5體積氯仿,蓋緊離心管,劇烈振蕩15s,待充分乳化后,室溫靜置5min。
6. 12,000g 4℃離心15min。
7. 小心吸取上清液至新的離心管中,加入等體積異丙醇,顛倒混勻后15-30℃靜置10min。
8. 12,000g 4℃離心10min。棄上清,加入1000μL75%乙醇,輕輕顛倒洗滌沉淀,12,000g 4℃離心5min后小心棄去乙醇。
9. 室溫干燥沉淀2-5min,加入適量RNase-free水溶解沉淀。
10. 1%凝膠電泳檢測RNA質量后于-80℃保存備用。
注意事項
1. 注意RNase的污染!
2. RNA干燥時不宜太過,否則不易溶解!