固相多肽合成就是不斷地在固相載體上加入α-氨基和側鏈基團被保護的氨基酸。FMOC基團是用來保護α-氨基中的N的,去除保護基團后,再加入第二個氨基酸。產生的多肽通過一個連接臂將C端連接在樹脂上,它可以被裂解下來。通常情況下,在多肽從樹脂上裂解下來的同時去除側鏈保護基團,一般采用哌啶去 FMOC保護基團,肽樹脂的裂解和側鏈保護基團去除一般用強酸,比如三氟乙酸,N,N-二甲基甲酰胺(DMF)是樹脂去保護、氨基酸反應和洗滌的首選溶劑。
1. 合成步驟:
步驟 | 溶液或溶劑 | 循環數 | 時間 |
1 | DMF | 2次 | 30s |
2 | 含20%哌啶DMF溶液 | 1次 | 5min |
3 | DMF | 1次 | 30s |
4 | 含20%哌啶DMF溶液 | 1次 | 10min |
5 | DMF | 6次 | 30s |
6 | Fmoc-AAFHBTUHPBtNMM15 | 1次 | 30-60min |
7 | DMF | 2次 | 30s |
HBTU: 2-(1H-Benzeotriazole-1-yl)-1,1,3,3,-tetramethyluroniumhexafluorophosphate
HOBt: N-Hydroxybnzotrizole?H2O
NMM: N-methylmorpholine
2. 從樹脂上分離下來: |
步驟 溶液或溶劑循環數時間1 DMF2次30s2含20%哌啶DMF溶液2次10min3 DMF6次 30s4DCM6次30s5DCM6次 30s6干燥1次10min7試劑K1次2.5h |
試劑K:TFA/苯甲硫醚/EDT/苯酚/水=87.5/5/2.5/2.5/2.5(v/v) 3. 純化: RP-HPLC純化 ① HPLC條件: 流動相:A)0.1%TFA水溶液 B)0.1%TFA乙腈溶液 梯度:A/ B(90/ 40)到A/ B(40/ 90)30min 流速:1ml/min 溫度:室溫(23℃) 檢測:214nm的紫外 樣品:凍干的粗品 ② 步驟: a. 將粗品溶解在流動相中 b. 注入20-30mg(2-2.5ml)樣品 c. 將主峰收集到50ml管中 d. 凍干 4. 鑒定: LC/MS條件: 流動相:A)0.05%TFA水溶液 B)0.1%TFA乙腈溶液 梯度:A/ B(90/ 10)到A/ B(40/ 60)15min 流速:1ml/min 溫度:室溫(23℃) 檢測:214nm的紫外 MS API:ESI
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