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  • 發布時間:2019-08-07 17:11 原文鏈接: 多肽制備

    固相多肽合成就是不斷地在固相載體上加入α-氨基和側鏈基團被保護的氨基酸。FMOC基團是用來保護α-氨基中的N的,去除保護基團后,再加入第二個氨基酸。產生的多肽通過一個連接臂將C端連接在樹脂上,它可以被裂解下來。通常情況下,在多肽從樹脂上裂解下來的同時去除側鏈保護基團,一般采用哌啶去 FMOC保護基團,肽樹脂的裂解和側鏈保護基團去除一般用強酸,比如三氟乙酸,N,N-二甲基甲酰胺(DMF)是樹脂去保護、氨基酸反應和洗滌的首選溶劑。

    1. 合成步驟:

    步驟 溶液或溶劑循環數時間
    1 DMF2次30s
    2含20%哌啶DMF溶液1次5min
    3 DMF1次 30s
    4含20%哌啶DMF溶液1次10min
    5DMF6次 30s
    6Fmoc-AAFHBTUHPBtNMM151次30-60min
    7DMF2次30s

                  HBTU: 2-(1H-Benzeotriazole-1-yl)-1,1,3,3,-tetramethyluroniumhexafluorophosphate
      HOBt: N-Hydroxybnzotrizole?H2O
      NMM: N-methylmorpholine

    2. 從樹脂上分離下來:

    步驟 溶液或溶劑循環數時間1 DMF2次30s2含20%哌啶DMF溶液2次10min3 DMF6次 30s4DCM6次30s5DCM6次 30s6干燥1次10min7試劑K1次2.5h

      試劑K:TFA/苯甲硫醚/EDT/苯酚/水=87.5/5/2.5/2.5/2.5(v/v)

    3. 純化:

    RP-HPLC純化

    ① HPLC條件:

    流動相:A)0.1%TFA水溶液

    B)0.1%TFA乙腈溶液

    梯度:A/ B(90/ 40)到A/ B(40/ 90)30min

    流速:1ml/min

    溫度:室溫(23℃)

    檢測:214nm的紫外

    樣品:凍干的粗品

    ② 步驟:

    a. 將粗品溶解在流動相中

    b. 注入20-30mg(2-2.5ml)樣品

    c. 將主峰收集到50ml管中

    d. 凍干

    4. 鑒定:

    LC/MS條件:

    流動相:A)0.05%TFA水溶液

    B)0.1%TFA乙腈溶液

    梯度:A/ B(90/ 10)到A/ B(40/ 60)15min

    流速:1ml/min

    溫度:室溫(23℃)

    檢測:214nm的紫外

    MS API:ESI

     


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