Duchenne型肌營養不良癥( Duchenne muscular dystrophy,DMI)是一種很常見的人類遺傳病,為X性染色體隱性遺傳性肌肉變性疾病,50%的病例由基因缺失引起,大約每3500個男嬰就有一個發病,1/3的病例由新的突變所致,肌營養不良基因長200kb,至少有70個外顯子,被35個平均35kb的內含子所間隔1。
目前尚無有效治療的方法,因而高度準確的產前診斷和DMD陽性篩選是十分重要的。
以往多用 Southern分析技術來診斷,但由于該基因由多達70個外顯子,至少需要7~9個cDNA克隆才能診斷,費用高、費時而難以常規開展。BMD是Becker型肌營養不良癥( Becker muscular dystrophy)的縮寫。BMD亦為X性染色體隱形遺傳性肌肉變性疾病。
BMD的發病率為新生男嬰的三萬分之一。65%的BMD病例的原因是基因缺失。 Chamberlain等利用多重PCR技術對DMD進行了檢測,設計了6對外顯子引物。用1umol/L引物加10UTaq酶,延伸溫度為?2℃3min,25個循環。
產物電泳后,如與正常對照的對應條帶相比有缺失或移位,即為異常。隨后該實驗室又將引物增加至9對,使至少80%的DMD基因缺失得到確定,能直接診斷50%以上的病例。 Hentemann等2設計了2對產物分別為140bp和73bp的引物,對42例病人檢測后,發現7例基因缺失并經 Southern雜交分析證實。Simard等報道用 Chamberlain的引物對DMD進行擴增,并對DNA模板處理進行了改進,用lm羊膜液離心后的細胞經非離子去垢劑和蛋白酶K的PCR緩沖液裂解后直接PCR擴增,效果令人滿意。
由于 DMD/BMD是等位基因,近來的文獻多同時檢測此兩種疾病。Begs等用多重PCR同時檢測肌營養不良基因的8個外顯子和啟動子,可使98%有基因缺失的DMD/BMD獲得診斷。 Covone等人用兩種方法對照研究了127例DMD/BMID2一種方法是用與 DMD CDNA相關的9種cDNA探針與HindⅢ消化的基因族DNA雜交,另一種方法是用9對DMD外顯子的引物進行多重PCR檢測,結果73例(57%)存在基因缺失,兩組方法結果相近。
我國華西醫科大學的學者亦用 Chamberlain的9對引物對17例DMD/MD病例進行了檢測,結果8例(47%)發現基因缺失,證明了針對西方人的引物序列同樣可以檢測中國病例。