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  • 發布時間:2020-08-18 11:24 原文鏈接: 大分子物質的水解實驗

    實驗方法原理 水解過程可通過底物的變化來證明,如細菌水解淀粉的區域,用碘測定不再產生藍色;水解明膠可觀察到明膠被液化;脂肪水解后產生脂肪酸改變培養基的pH,其中的中性紅指示劑使培養基從淡紅色變為深紅色。

    實驗材料 金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌大腸桿菌綠膿桿菌

    試劑、試劑盒 油脂培養基淀粉培養基明膠培養基盧戈氏碘液

    儀器、耗材 無菌平皿接種環接種針

    實驗步驟

    1.  油脂水解試驗


    (1)將溶化的油脂培養基冷至45℃左右時,充分振蕩,使油脂均勻分布,用無菌操作倒入平皿中,待凝。


    (2)將制成的平板用記號筆劃成兩半,一半接種金黃色葡萄球菌作為對照,另一半接種枯草芽孢桿菌作為試驗菌,均用無菌操作畫“+”接種。


    (3)將接種的平板倒置于37℃溫室中培養24小時。


    (4)取出平板,觀察平板底層長菌的地方,如出現紅色斑點,說明脂肪被水解,為陽性反應。


    2.  淀粉水解試驗


    (1)將淀粉培養基溶化后,冷至45℃左右,以無菌操作制成平板。


    (2)用記號筆將平板劃成兩半,一半接種大腸桿菌作為試驗菌,另一半接種枯草芽孢桿菌作為對照菌,均用無菌操作劃線接種。


    (3)將上述已接種的平板倒置于37℃溫室中培養24小時。


    (4)將已培養24小時的平皿取出,打開皿蓋,滴加少量盧戈氏碘液于平板上,輕輕旋轉平皿,使碘液均勻鋪滿整個平板。如菌苔周圍出現無色透明圈,說明淀粉已

    被水解。透明圈的大小、說明該菌水解淀粉能力的強弱。


    3.  明膠液化試驗


    (1)取三管明膠培養基,用記號筆標明各管接種的菌名。分別以無菌操作用接種針穿刺接種大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、綠膿桿菌。


    (2)接種后,置20℃溫室中培養2~5天。


    (3)觀察明膠培養基液化情況。

     

    4.  將結果填入下表。“+”表示陽性;“-”表示陰性。


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