（3）找到該文檔，郵件選擇打開方式為記事本，可得引物信息。再次點擊文檔，另存為Up-LF或Down-LB.txt文件。這里的第16套引物，我們需要它的下游環引物即LB，故名為Down-LB。這樣命名的目的是為了防止混淆；
（4）同樣打開LAMP引物設計平臺（http://primerexplorer.jp/lampv5e/index.html）并上傳導入Down-LB.txt文件；
（5）依次點擊Generate和Display，即可得相應環引物。
顯然，有我們要選的LB。從高到低，依次為系統默認引物性能從強到弱的環引物。
Tip 3：如果某套引物無法自動設計出對應的環引物時，有三種策略：
一是點擊DetailSettings，調整引物長度至15-28試試，不要輕易動Tm和GCrate兩項設置；
二是可直接選取F1c和F2之間的序列作為上游環引物，或B1c和B2之間的序列作為下游環引物，但不得有很強的自身引物二聚體結構，且Tm值需在60-66之間。這只是無奈之舉；
三是重復步驟8，重新挑選引物組合，使平臺能自動設計出環引物為最佳。
11. 至此，以選擇第16和39套引物組合為例，我們獲得了IMSA引物設計所需的七個位點，從上游至下游依次為F3、F2、LF、F1c/B1c、B2、LB、B3，其中F1c和B1c完全互補，算作同一個位點。按著IMSA引物位點組合，可得：
IMSA外引物DsF=LF+F3
IMSA外引物DsR=LB+B3
IMSA內引物FIT=F1c+F2
IMSA內引物RIT=B1c+B2
IMSA莖引物SteF=LB
IMSA莖引物SteR=LF
12. 合成所設計的IMSA引物，并通過實際實驗，從特異性、靈敏度和反應時間等方面來驗證該引物是否合適。經濟條件允許的話，可同時合成三套或三套以上，以縮短驗證周期。