如何檢測蛋白是否泛素化？

       繼上周整理的泛素化蛋白快速富集純化的解決方案后，最近又有客戶問“我想在體外檢測組織中的一個蛋白是否在處理因素作用后發生泛素化，請問有這方面的實驗方法嗎，或者試劑盒嗎？”作為泛素研究領域的專家，LifeSensors可為您提供全面的泛素研究解決方案，如何鑒定靶蛋白是否發生泛素化修飾？你問了，我安排！

       如何判斷蛋白是否泛素化? 是哪種類型的泛素化修飾？ UbiTest可以給您答案。

       UbiTest檢測原理：先通過TUBEs富集純化樣本中的泛素化總蛋白，隨后，將分離到的泛素化蛋白經或者不經去泛素化酶DUBs處理，（+）/（-）DUBs處理的蛋白樣本用靶蛋白的特異性抗體進行免疫印跡（WB）分析，通過條帶比對分析實現對泛素化蛋白的定性及半定量檢測。

       實例分析==＞

       樣本：Jurkat細胞裂解液

       實驗目的：MDM2和TNF-R1蛋白是否泛素化

       實驗流程：通過TUBEs富集純化樣本中的泛素化總蛋白，經去泛素化酶DUBs處理，后，用靶蛋白的特異性抗體進行WB檢測

       檢測抗體：MDM2抗體

       Lane 1: 富集純化的蛋白樣本不經DUBs處理

       Lane 2: 富集純化的蛋白經廣譜型的DUBs處理（可以去除所有類型的多聚泛素鏈）

       Lane 3: 富集純化的蛋白經特異性針對K48-泛素鏈的去泛素化酶處理（只能水解K48-泛素鏈）

       結果：Lane 2的條帶信號（~55kda）與Lane 1相比明顯增強，說明MDM2被泛素化修飾了

       Lane 3的條帶信號（~55kda）與Lane 1相比有所增加，但是比Lane 2的信號明顯減弱，說明特異性針對K48-泛素鏈的去泛素化酶并沒有水解掉靶蛋白近端的泛素，或者說MDM2還存在其他連接類型的多聚泛素鏈。

       檢測抗體：TNF-R1抗體

       Lane 1: 富集純化的蛋白樣本不經DUBs處理

       Lane 2: 富集純化的蛋白經廣譜型的DUBs處理（可以去除所有類型的多聚泛素鏈）

       Lane 3: 富集純化的蛋白經特異性針對K63-泛素鏈的去泛素化酶處理（只能水解K63-泛素鏈）

       結果：Lane 2的條帶信號（~50kda）與Lane 1相比明顯增強，說明TNF-R1被泛素化修飾了

       Lane 3的條帶信號（~140kda）與Lane 1相比明顯減弱，Lane 3的條帶信號（~50kda）與Lane 1相比有所增強，說明TNF-R1的泛素化類型為K63，但是還存在其他類型的泛素化修飾，所以比Lane 2的信號弱很多。