如何正確利用MPN法計算菌落？

　　1915年，McCrady首次發表了用MPN(最可能數MostProbale Number,MPN)來估算細菌濃度，這是一種應用概率理論來估算細菌濃度的方法。目前，中國普遍將MPN法用于食品大腸菌群等的檢測。由于對MPN計數法的理解不充分，導致很多檢測人員在使用MPN法進行微生物定量檢測的時候存在很多錯誤認識，從而導致檢測結果的錯誤。正確理解MPN計數法對實驗室的微生物檢測及食品工業的微生物控制都有著重要的指導作用。以下對使用MPN計數法時容易出現的問題給予說明。

　　一、使用MPN計數法做檢測時，操作中應確保以下三個方面：

　　1)樣品均質和稀釋均勻。

　　MPN計數法基于兩點假設：1、微生物在完全混勻的稀釋液里隨機分布；2、只要接種的稀釋液里含有微生物就一定在液體培養基里生長。若樣品及稀釋液混勻不充分，就滿足不了MPN計數法統計的基礎，從而不能獲得準確的結果。因此，在檢測過程中，必須按要求對樣品進行均質、對稀釋液充分混勻。

　　2)各稀釋液完全接種通常使用三個稀釋度進行MPN法的檢測。

　　然而，很多檢測人員往往會根據樣品估計其結果，當認為細菌數量比較低，陽性管數少時，為圖省事僅接種前兩個稀釋度，這種做法是錯誤的。三個稀釋度中，不管前兩個稀釋度的結果如何，下一個稀釋度的結果都是無法預測的。僅有前兩個稀釋度的結果無法滿足三稀釋度MPN計算公式的要求，因此就無法獲得MPN結果的。在實際工作中，即便預先估計樣品中細菌濃度很低，所有稀釋度都必須全部接種。

　　3)接種體積準確MPN表和MPN計算公式都是和接種體積密切相關，接種體積直接影響MPN結果，因此接種體積必須準確，這是MPN計數法成功的關鍵。

　　另一方面，培養基的體積并不作為參數出現在MPN計算公式中，只要接種后培養基的濃度接近正常的濃度(單倍濃度)，滿足目標微生物的生長需求即可，培養基的量允許存一定的誤差。

　　二、應按要求進行確證實驗 有的MPN法需要完成可疑菌落的確證。只有最終確定為陽性的管才能計數為陽性管，如果沒有完成確證步驟，把中間步驟的陽性管數記做陽性，就會獲得偏高的檢測結果。

　　三、正確使用MPN表MPN表應根據接種稀釋液中所含樣本的量查詢，而不是直接根據接種稀釋液的量查詢。如第一稀釋度接種10倍稀釋液10ml，則第一稀釋度接種樣本量為10g(ml)/10=1g(ml)，應根據1g(ml)查表或計算而不是根據10g(ml)。對比GB4789.3-2010與GB/T4789.3-2003的MPN表會發現，GB/T4789.3-2003中有64種組合，而GB4789.3-2010中僅有40種，這是因為新版的MPN表刪除了24種包括“0-0-3”這類失去意義的組合。在使用GB 4789.3-2010時，若出現無法查表的情況，應對該結果持高度懷疑，并棄用該結果。

　　四、檢測結果的正確理解 雖然實驗結果以MPN值表示，但MPN值并不能表示實際微生物數量，這是MPN計數法的局限性所在。實際微生物數量有95%的可能性是這個置信區間中的一個值，MPN值是置信區間中可能性最大的一個。如應用GB4789.3-2010檢測某產品，接種量0.10g,0.01g,0.001g對應的陽性管數為1-1-0，查表MPN值為“7.4/g”，其95%可信限上限為“1.3/g”、下限為“20/g”。對這樣的結果解釋為：該產品中真實大腸菌群有95%的可能是在1.3/g～20/g之間，最大可能是7.4/g。若該產品的安全標準為<90MPN/g，按該標準判為合格，此項目的安全風險可忽略不計；若該產品的安全標準為<10MPN/g時，雖同理判為合格，但該產品中真實大腸菌群>10/g的可能性不能忽略，這就存在一定的風險。

　　五、對標準的正確選擇在使用MPN計數法檢測食品中大腸菌群時，部分檢測人員不能正確選擇檢測標準，從而導致無法根據檢測結果做評判。根據《中華人民共和國衛生部2009年第16號公告》中規定：現行食品標準中規定的大腸菌群指標以“MPN/100克或MPN/100毫升”為單位的，適用《食品衛生微生物學檢驗大腸菌群測定》(GB/T4789.3-2003)進行檢測；以“MPN/克或MPN/毫升”、“CFU/克或CFU/毫升”為單位的，適用《食品衛生微生物學檢驗大腸菌群計數》(GB/T 4789.3-2008)進行檢測。而《食品衛生微生物學檢驗大腸菌群計數》(GB/T 4789.3-2008)已被《食品安全國家標準食品微生物檢驗大腸菌群計數》(GB4789.3-2010)取代，在檢測工作中應根據上述規定選擇正確的檢測標準。

　　參考文獻：賈俊濤,梁成珠,馬維興.食品微生物檢測工作指南[M].