如何選定qPCR實驗用純水儀？

目前疫情的防控工作取得了階段性的成效，基于實時熒光定量PCR的核酸檢測技術在新冠病毒快速鑒定及確診中發揮了重要作用。

什么是實時熒光定量PCR？

實時熒光定量PCR（Quantitative Real-time PCR）技術，簡稱qPCR,是在PCR反應體系中加入熒光物質（熒光染料或熒光標記的特異性探針），利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。

與普通PCR相比，實時熒光定量PCR技術是一次由定性技術向定量技術的飛躍。運用該項技術，可以對DNA、RNA樣品進行相對定量、絕對定量和定性分析。

實驗流程：

在實時熒光定量PCR實驗中，可以分為樣本采集，RNA提取，RNA質量鑒定，反轉錄及數據分析幾個步驟，在進行引物、模板的稀釋，試劑的配制和補足反應體系時都會用到水，水質量的好壞直接影響最終數據分析的結果。

水中的顆粒物，離子含量，有機物及細菌微生物等雜質對實驗都會帶來影響，最值得關注的因素有以下兩個方面：

1. DNA酶和RNA酶

DNA酶和RNA酶能夠特異性地降解DNA和RNA。在進行實時熒光定量PCR時，去除這兩種酶從而保證提取的RNA和DNA樣本的完整性十分關鍵。尤其在提取RNA的時候，RNA極易被降解。這是因為RNase非常穩定，且無處不在，用常規的高溫高壓蒸汽方法和蛋白酶抑制劑不能使所有的RNase完全失活。如果樣本中的核酸被降解，會影響檢測結果的準確性，甚至造成假陰性檢測結果。

因此，實時熒光定量PCR實驗用超純水必須有效降低DNA酶和RNA酶的含量，減少對實驗的影響。

2. 鎂離子

實時熒光定量PCR實驗需要根據不同的引物對和模板確定最佳的鎂離子濃度。

Mg2+濃度過低，會影響DNA聚合酶的活性，導致產量降低，影響實時定量的敏感性；

Mg2+濃度過高，會增加引物二聚體的形成，這會影響特異性。

因此，實時熒光定量PCR實驗用超純水必須控制Mg2+濃度，避免背景因素帶來的不確定性。

綜上，實時熒光定量PCR實驗推薦使用超純水，水質要求如下圖所示：

純水儀器選型推薦：

根據上述的分析和用水指標，可以采用樂楓的Genie G一體超純水機和Genie PURIST超純水機，這兩種純水設備都可以滿足實時熒光定量PCR反應的用水要求。

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