嚴格的說你的這個問題不是三言兩語能講清楚的，最好參考有關書籍，如近期出版的【熒光分析法】一書。同時也不知你使用的是何種型號的儀器，只能簡單的略說一二：
（1）如果你的儀器有三維掃描功能，那就非常簡單了，按照說明書要求去做就可以了。
（2）如果儀器沒有上述功能，一般可將儀器的激發波長(EX)先設定為200nm，然后進行發射波長(EM)模式掃描，(EM)波長范圍暫設定為210－800nm，然后記錄所有出現的峰值波長；改變激發波長(EX)后再掃描，如第二次發射圖譜中的某個（或某些）峰的位置沒有位移（或位移很少），一般來說這個（或這些）峰就是熒光峰；因為熒光峰的位置是不隨激發波長的改變而改變的，僅是峰高（或峰面積）發生改變
（3）將確定的熒光峰的波長作為發射波長(EM)固定下來，再做激發波長(EX)的掃描，激發波長的范圍要小于發射波長（根據斯拖克斯定律）；如果僅出一個峰則很簡單確立下來，再將這個波長固定下來重新做真正的發射波長(EM)掃描，可以得到良好的信噪比的結果值；如果做激發波長(EX)掃描后出現幾個峰，則需要有經驗的選擇了，一般選擇峰形高度適合并又有一定帶寬的峰為激發波長。