一、BUdR 貯存液的制備
BUdR 5 mg（先用0.5 ml 1 N NaOH 溶解），然后補加蒸餾水至5 ml，即成1000 μg/ml的貯存液，因BUdR遇光會發生分解，貯存液應避光冰凍保存。
二、BUdR 摻入和制片程序
1. BUdR 培養液制備
先制備好含BUdR的培養液（最終濃度為3~10 μg/m）；
2. BUdR 摻入
如用傳代細胞，在末次傳代后，改換用含BUdR的培養液培養；如為人末梢血細胞，一開始就用含BUdR培養液培養（培養瓶放在特制黑色木盒、黑布中或用黑紙包裹）37 ℃溫箱內培養；
3. 中止摻入與制片
待細胞經歷兩個細胞周期（人周圍血細胞培養48或72 小時）；
4. 加秋水仙素→制片（與其它染色體制備法相同）。
三、姐妹染色單體分化染色
1. 方法一
（1）老化
中期染色體標本老化1～2 天；
（2）預處理
放入預熱至85～89 ℃的1 M NaH2PO4溶液中（用NaOH調pH至8.0）處理15 分鐘；
（3）制片
然后用溫蒸溜水輕輕漂洗、蒸餾水沖洗、晾干、Giemsa液染色10 分鐘、晾干、二甲苯透明、封固。
2. 方法二（FPG 法）
（1）標本
摻入BUdR后的中期染色體標本；
（2）熒光染色
用熒光染料Hoechst 33258（用pH7.0 Sorensen緩沖液配制，濃度為0.5 μg/ml）染色12～15 分鐘；
（3）黑光燈照射
自來水沖洗、加1 滴pH 8.0 Sorensen緩沖液，覆以蓋片，用黑光燈照射（20w），距離5 厘米，時間半小時；
（4）溫浴
50～60 ℃熱的2×SSC 液溫育2 小時，蒸餾水沖洗、晾干；
（5）染色
pH 6.8 的2 %Giemsa染色15 分鐘、透明封固。
3. 方法三
（1）標本
摻入BUdR后的中期染色體標本，置30 瓦日光燈下，燈距3 厘米，照射6 小時；
（2）溫浴
用2×SSC 液（60 ℃）處理15 分鐘；
（3）Giemsa染色10 分鐘，也可獲得滿意的標本。
此外還有其它一些分化染色法，但較復雜，不常使用。上述分化染色法中以方法二效果較好。
展開 | 
